В стакан или колбочку отмеривают 10 мл мочи и 10 мл дистиллированной воды, перемешивают, подкисляют 20 каплями 10% раствора хлористоводородной кислоты и титруют 0,001 н. раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола до розовой окраски, на этом основан принцип метода реакции. Расчет содержания аскорбиновой кислоты в моче проводят по формуле:
,
где Х – содержание аскорбиновой кислоты, мг/сут; 0,088 – содержание аскорбиновой кислоты, мг; А – результат титрования 0,001 н. раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола, мл; Б – объем мочи, взятый для титрования, мл; В – среднее суточное количество мочи (для мужчин – 1500 мл, для женщин – 1200 мл).
Вывод: записать результаты опыта и расчётных данных.
Опыт 2. Количественное определение витамина Р в чае.
Известно несколько соединений, оказывающих Р-витаминное действие (рутин и др.). В основе их лежит скелет флавона.
Наиболее изучены строение и свойства рутина:
Действие витамина Р и витамина С взаимосвязано, они участвуют в окислительно-восстановительных процессах. Терапевтическое действие витамина С более эффективно в присутствии витамина Р. При недостатке в организме витамина Р у человека повышается проницаемость капилляров.
Рутин – кристаллическое вещество желто-оранжевой окраски. Содержится в тех же продуктах, что и витамин С: в чае, фруктах и ягодах – бруснике, клюкве н др. Количественное определение витамина Р проводят в вытяжке из чая.
Принцип метода. Рутин способен окисляться перманганатом калия; в качестве индикатора применяется индигокармин, который вступает в реакцию с перманганатом калия после того, как окислится весь рутин. Экспериментально установлено, что 1 мл 0,1 н. раствора перманганата калия окисляет 6,4 мкг рутина.
Порядок выполнения работы.
К 100 мг чая приливают 50 мл горячей дистиллированной воды и проводят экстракцию в течение 5 мин. 10 мл экстракта чая отмеривают в стаканчик или колбочку, добавляют 10 мл дистиллированной воды и 5 капель индигокармина (появляется синее окрашивание). Титруют из микробюретки 0,05 н. раствором КМпО4 до появления устойчивой желтой окраски.
Определяют процентное содержание рутина в чае. Расчет производят по следующей формуле:
,
где Х – содержание витамина Р в препарате, %; 3,2 – стандартный пересчетный коэффициент; А – результат титрования 0,05 н. раствором перманганата калия, мл; V1 – объем, в котором растворена взятая для анализа навеска, мл; 100 – общее количество вещества для расчета процентного содержания, г; V2 – объем раствора, взятого для титрования, мл; Р – навеска, мг; 1000 – перевод .микрограммов в миллиграммы (Р = 30 – 50мг/100 г).
Вывод: краткое описание хода работы, записать результаты опыта и расчётных данных.
Качественные реакции на жирорастворимые витамины.
Опыт 1. Реакция на витамин А (ретинол).
Качественные реакции на витамин А основаны на образовании окрашенных соединений сложной структуры.
Принцип метода. В основе приведенной реакции лежит способность серной кислоты отнимать от витамина А воду с образованием цветных продуктов реакции.
Порядок выполнения работы.
В сухую пробирку вносят 1 каплю рыбьего жира и 4-5 капель хлороформа. Смесь хорошо перемешивают встряхиванием и добавляют 1 каплю концентрированной серной кислоты. Появляется сине-фиолетовое окрашивание, быстро переходящее в красно-бурое.
Вывод: записать результаты опыта.
Опыт 1.1.Реакция витамина А с сульфатом железа.
Принцип метода. При взаимодействии ретинола с FeSО4 в кислой среде образуется соединение розово-красного цвета. Каротины дают в этой реакции зеленоватое окрашивание.
Порядок выполнения работы.
К 1-2 каплям рыбьего жира осторожно (работают под тягой) прибавляют 5-10 капель насыщенного раствора сульфата железа (FeSO4, приготовленного на ледяной уксусной кислоте, и добавляют 1 каплю концентрированной серной кислоты. Появляется голубое окрашивание, постепенно переходящее в розово-красное.
Вывод: записать результаты опыта.
Опыт 1.2.Реакция витамина А с треххлористой сурьмой
В результате водоотнимающего действия хлорида сурьмы (SbCl3 витамин А превращается в соединение синего цвета. Эта цветная реакция используется для количественного определения витамина А колориметрическим методом.
Порядок выполнения работы.
В совершенно сухую пробирку помещают 1 каплю рыбьего жира и 4-5 капель насыщенного (33%-го) раствора хлорида сурьмы (III) в безводном хлороформе. Появляется синее окрашивание, которое постепенно переходит в розово-фиолетовое.
Внимание! Пробирка должна быть сухой, так как в присутствии воды реакция не идет из-за способности хлорида сурьмы (III превращаться в таких условиях в хлороксид сурьмы, который не может реагировать с ретинолом, вызывая помутнение раствора. Для устранения следов влаги в пробу можно добавить 1-2 капли уксусного ангидрида.
Источник
Инструкция к практическому занятию «Качественные реакции на жирорастворимые витамины»
Принцип метода:В основе обнаружения различных жирорастворимых витаминов лежат качественные реакции на витамины А, D, Е, К, в результате которых образуются окрашенные соединения.
В сухую пробирку по стенке наливают 3 капли масляного раствора витамина А или рыбьего жира. Сюда же добавляют каплю концентрированной H2SO4. В месте соприкосновения раствора витамина А с серной кислотой появляется фиолетовое окрашивание, переходящее в вишнево-красное.
В пробирку, содержащую 2-3 капли масляного раствора витамина А или рыбьего жира, добавляют 5-10 капель ледяной уксусной кислоты, насыщенной сульфатом железа, и 1-2 капли концентрированной H2SO4. Появляется голубое окрашивание, переходящее в красно-розовое. Каротины дают при этой реакции зеленое окрашивание.
Качественная реакция на витамин К
Ход работы:
В пробирку, содержащую 2 мл спиртового раствора витамина К, добавляют 2 мл 5% раствора диэтилдитиокарбамата и 0,5 мл 2% раствора гидроксида натрия в этаноле. Раствор приобретает голубое окрашивание.
Качественные реакции на витамин Е
Ход работы:
Реакция с азотной кислотой.
В сухую пробирку вносят 5 капель спиртового раствора витамина Е и добавляют 1 мл концентрированной HNO3 , интенсивно встряхивают и наблюдают постепенное появление красного окрашивания, которое обусловлено тем, что продукт окисления α-токоферола имеет хиноидную структуру.
Реакция с хлорным железом.
В сухую пробирку вносят 0,5 мл спиртового раствора α-токоферола, затем добавляют 0,5 мл раствора 1% хлорида железа и перемешивают. Наблюдается появление красного окрашивания, так как α-токоферол окисляется до α-токоферилхинона.
Источник
КАЧЕСТВЕННЫЕ РЕАКЦИИ НА ВИТАМ. Качественные реакции на витамины
Название
Качественные реакции на витамины
Дата
11.03.2018
Размер
96.5 Kb.
Формат файла
Имя файла
КАЧЕСТВЕННЫЕ РЕАКЦИИ НА ВИТАМ.doc
Тип
Документы #38137
Подборка по базе: Общие реакции организма на повреждения (1).pptx, ТАБЛИЦА ВИТАМИНЫ.docx, «Лекарства» для здоровых. Витамины. Ферменты..docx, 1 ФИТО Витамины и Полисахариды.pdf, СРО Витамины.docx, ОП.05 Вет. фармакология витамины.docx, Химические реакции.docx, Крайнев фарм задачи витамины 322.docx, 6_Фазы иммунной реакции.docx, серолгические реакции.docx
Цель работы: ознакомиться со свойствами и особенностями структуры некоторых витаминов.
Задачи:
проделать предложенные химические реакции;
проанализировать полученные результаты и сделать вывод.
А. Качественные реакции на водорастворимые витамины
1. Реакции на витамин В1 (тиамин)
а) Диазореакция на тиамин
При добавлении к раствору тиамина в щелочной среде диазо-реактива образуется сложное соединение этого витамина с диазо-бензолсульфокислотой, окрашенное в оранжевый или красный цвет. Диазобензолсульфокислота образуется в результате реакции диазотирования при взаимодействии сульфаниловой кислоты с нитритом натрия (или калия):
Затем диазобензолсульфокислота реагирует в щелочной среде с тиамином с образованием окрашенного азосоединения:
Ход работы. К диазореактиву, состоящему из 5 капель 1%-го раствора сульфаниловой кислоты и 5 капель 1%-го раствора нитрита натрия, прибавляют 1-2 капли 5%-го раствора тиамина и затем по стенке, наклонив пробирку, осторожно добавляют 5-7 капель 10%-го раствора карбоната натрия. На границе двух жидкостей образуется оранжево-красное кольцо. б) Реакция окисления тиамина
В щелочной среде тиамины окисляются железосинеродистым калием (феррицианидом калия) с образованием окрашенного в желтый цвет тиохрома. Тиохром обладает синей флуоресценцией при ультрафиолетовом облучении раствора в флуороскопе, и это свойство используется при количественном определении тиамина.
Ход работы. 1 каплю 5%-го раствора тиамина смешивают в пробирке с 5-10 каплями 10%-го раствора гидроксида натрия и затем добавляют 1-2 капли раствора железосинеродистого калия. При нагревании жидкость окрашивается в желтый цвет вследствие окисления тиамина в тиохром. 2. Реакция восстановления витамина В2 (рибофлавина)
Окисленная форма рибофлавина вещество желтого цвета, флуоресцирующее в ультрафиолетовых лучах. Витамин В2 легко восстанавливается через промежуточные соединения красного цвета (родофлавин) в бесцветный лейкофлавин. Реакция обусловлена восстановлением рибофлавина водородом, образующимся при добавлении металлического цинка к соляной кислоте. При этом желтая окраска раствора переходит в розовую, затем раствор обесцвечивается. При взбалтывании обесцвеченного раствора лейкосоединение вновь окисляется кислородом воздуха в рибофлавин.
Ход работы. В пробирку наливают 10 капель 0,025%-й взвеси рибофлавина в воде, добавляют 5 капель концентрированной соляной кислоты и небольшой кусочек металлического цинка. Наблюдают бурное выделение пузырьков водорода и изменение окраски жидкости. 3. Реакции на витамин В3 (РР, никотиновую кислоту, никотинамид)
а) Реакция с ацетатом меди
При нагревании никотиновой кислоты с раствором уксуснокислой меди образуется плохорастворимый синий осадок медной соли витамина РР.
Ход работы. 5-10 мг никотиновой кислоты растворяют при нагревании в 10-20 каплях 10%-го раствора уксусной кислоты. К нагретому до кипения раствору добавляют равный объем 5%-го
раствора ацетата меди. Жидкость становится мутной, окрашивается в голубой цвет, а при стоянии выпадает синий осадок никотината меди. б) Реакция обнаружения аминогруппы в никотинамиде
При нагревании в присутствии гидроксида натрия амидная связь в никотинамиде гидролизуется с выделением аммиака.
Ход работы. В пробирку помещают 5-10 мг порошка витамина РР, прибавляют 2 мл 0,1 М раствора гидроксида натрия и нагревают до кипения. Ощущают запах образующегося аммиака.
в) Реакция с гидросульфитом натрия
Витамин РР восстанавливается гидросульфитом натрия с образованием соединения желтого цвета.
Ход работы. В пробирку вносят 5-10 мг витамина РР, добавляют 1,5 мл 10%-го раствора бикарбоната натрия, перемешивают и прибавляют 1,5 мл свежеприготовленного 5%-го раствора гидросульфита натрия. Жидкость окрашивается в желтый цвет. 4. Реакции на витамин В6 (пиридоксин)
Активностью витамина В6 обладают три соединения, объединенных под названием “пиридоксин”:
а) Феррохлоридная проба на витамин В6.
При взаимодействии пиридоксина с хлорным железом образуется комплексная соль типа фенолята железа, окрашенная в красный цвет Ход работы. В пробирку наливают 1 мл 1%-го раствора витамина В6, добавляют 2 капли 1%-го раствора хлорида железа и содержимое встряхивают. Жидкость окрашивается в красный цвет.
б) Реакция осаждения витамина В6.
Пиридоксин, являясь производным пиридина, осаждается фосфорномолибденовой, пикриновой, фосфорновольфрамовой кислотами и другими реактивами на алкалоиды.
Ход работы. К 2-3 каплям 1%-го раствора витамина В6 добавляют 2-3 капли 1%-го раствора фосфорномолибденовой кислоты и наблюдают появление осадка. 5. Качественные реакции на витамин В12 (кобаламин)
В состав витамина В12 входит кобальт. В результате взаимодействия ионов кобальта с тиомочевиной при нагревании образуется роданид кобальта зеленого цвета.
1. Содержимое одной ампулы с кобаламином переносят в пробирку, добавляют 3-5 капель концентрированной серной кислоты и нагревают до обесцвечивания в пламени спиртовки, установленной в вытяжном шкафу с включенной тягой. По окончании минерализации в пробирку осторожно, медленно, при постоянном перемешивании добавляют 1 мл дистиллированной воды.
2. На беззольный фильтр наносят 2-3 капли 10%-го раствора тиомочевины, осторожно высушивают над пламенем спиртовки. Затем наносят 1-2 капли минерализата В12 и осторожно нагревают фильтр над пламенем спиртовки. На фильтре, чаще ближе к краю, появляется зеленое окрашивание. 6. Качественные реакции на витамины группы Р (биофлавоноиды)
Витамины группы Р производные флавона: рутин, эриодиктиол, геспередин, кверцетин, эпикахетин и другие. Одним из наиболее активных биофлавоноидов является рутин гликозид кверцетина и дисахарида рутинозы:
а) Реакция с хлоридом железа
Биофлавоноиды образуют с хлоридом железа комплексное соединение, окрашенное в изумрудно-зеленый цвет. Координационные связи возникают между ионом железа и атомами кислорода фенольных гидроксильных групп молекулы витамина.
Ход работы. К 1-2 мл насыщенного водного раствора рутина прибавляют 3-5 капель 1%-го раствора хлорида железа (FeCl3). Появляется зеленое окрашивание.
б) Реакция с концентрированной серной кислотой
Концентрированная серная кислота образует с биофлавоноидами оксониевые (флавилиевые) соли, растворы которых характеризуются ярко-желтой окраской.
Ход работы. К 1-2 мл насыщенного водного раствора рутина осторожно по стенке пробирки добавляют 0,5-1 мл концентрированной серной кислоты. На границе двух жидкостей возникает окрашенное в желтый цвет кольцо.
в) Реакция Фелинга на рутин
При кислотном гидролизе рутина отщепляется молекула дисахарида рутинозы, которая затем распадается на D-глюкозу и L-рамнозу, обладающие восстанавливающими свойствами.
Ход работы. К 0,5 г порошка рутина приливают 5 мл 0,5%-го раствора соляной кислоты, нагревают при периодическом перемешивании до кипения и кипятят в течение 1 минуты. Пробирку охлаждают, и раствор фильтруют через бумажный фильтр. К фильтрату добавляют 3 мл 10%-го раствора гидроксида натрия и 3 мл
свежеприготовленного реактива Фелинга (1,5 мл раствора Фелинга и 1,5 мл раствора Фелинга ). Содержимое пробирки перемешивают стеклянной палочкой, нагревают до кипения и наблюдают образование красного осадка оксида меди (). 7. Реакции на витамин С (аскорбиновую кислоту)
Все качественные реакции на аскорбиновую кислоту основаны на ее способности легко вступать в окислительно-восстановительные реакции. Окисляясь, аскорбиновая кислота превращается в дегидроаскорбиновую, восстанавливая различные соединения:
а) Реакция восстановления феррицианида калия c витамином С
Аскорбиновая кислота в щелочной среде восстанавливает ферри-цианид калия (железосинеродистый калий) до ферроцианида калия (железистосинеродистого калия), который при взаимодействии с хлорным железом в кислой среде образует плохо растворимую в воде соль трехвалентного железа берлинскую лазурь, выпадающую в осадок темно-синего цвета: 1. Аскорбиновая + 2К3Fе(СN)6 + 2КОН дегидро- + 2К4Fе(СN)6 + 2Н2О кислота феррицианид аскорбиновая ферроцианид
калия кислота калия
Ход работы. В одну пробирку (опыт) вносят 5 капель 1%-го раствора витамина С, а в другую (контроль) 5 капель дистиллиро-ванной воды. В обе пробирки добавляют по 1 капле 10%-го раствора гидроксида калия и 1 капле 5%-го раствора железосинеродистого калия, перемешивают, после чего добавляют по 3 капли 10%-го раствора соляной кислоты и 1 капле 1%-го раствора хлорида железа. В опытной пробирке выпадает темно-синий осадок берлинской лазури, который при осторожном наслаивании воды становится более отчетливым.
б) Реакция восстановления метиленовой сини витамином С
Витамин С обесцвечивает раствор метиленовой сини, восста-навливая ее в лейкосоединение:
Ход работы. В двух пробирках (опыт и контроль) смешивают по 1 капле 0,01%-го раствора метиленовой сини и 1 капле 10% раствора бикарбоната натрия. В опытную пробирку добавляют 5 капель 1%-го раствора витамина С, а в контрольную столько же дистиллированной воды. Нагревание растворов в пробирках приводит к обесцвечиванию жидкости в опытной пробе.
в) Йодная проба на витамин С
Раствор Люголя (раствор йода в йодиде калия) при добавлении к нему витамина С обесцвечивается вследствие восстановления молекулярного йода с образованием йодистоводородной кислоты.
Ход работы. В две пробирки (опыт и контроль) наливают по 10 капель дистиллированной воды и 2 капли раствора Люголя. В опытную пробирку добавляют 5-10 капель 1%-го раствора аскорбиновой кислоты, в контрольную – столько же дистилированной воды. В опытной пробирке раствор обесцвечивается. г) Серебряная проба на витамин С
При добавлении витамина С к нитрату серебра выпадает осадок в виде металлического серебра:
кислота кислота Ход работы. В две пробирки (опыт и контроль) вносят по 5 капель 1%-го раствора аскорбиновой кислоты; затем в опытную пробирку добавляют 1-2 капли 1%-го раствора азотнокислого серебра, а в контрольную 1-2 капли дистиллированной воды. В опытной пробе наблюдается появление темного осадка металлического серебра. Б. Качественные реакции на жирорастворимые витамины
1. Реакции на витамин А
витамин А1 (ретинол)
Качественные реакции на витамин А основаны на образовании окрашенных соединений сложной структуры.
а) Реакция Друммонда
В присутствии концентрированной серной кислоты ретинол обезвоживается с образованием цветных продуктов реакции.
Ход работы. В сухую пробирку вносят 1 каплю рыбьего жира и 4-5 капель хлороформа. Смесь хорошо перемешивают встряхиванием и добавляют 1 каплю концентрированной серной кислоты. Появляется сине-фиолетовое окрашивание, быстро переходящее в красно-бурое.
б) Реакция витамина А с сульфатом железа ()
При взаимодействии ретинола с FeSО4 в кислой среде образуется соединение розово-красного цвета. Каротины дают в этой реакции зеленоватое окрашивание.
Ход работы. К 1-2 каплям рыбьего жира осторожно (работать под тягой) прибавляют 5-10 капель насыщенного раствора сульфата железа (FeSO4, приготовленного на ледяной уксусной кислоте, и добавляют 1 каплю концентрированной серной кислоты. Появляется голубое окрашивание, постепенно переходящее в розово-красное.
В результате водоотнимающего действия хлорида сурьмы (SbCl3 витамин А превращается в соединение синего цвета. Эта цветная реакция используется для количественного определения витамина А колориметрическим методом.
Ход работы. В совершенно сухую пробирку помещают 1 каплю рыбьего жира и 4-5 капель насыщенного (33%-го) раствора хлорида сурьмы (III) в безводном хлороформе. Появляется синее окрашивание, которое постепенно переходит в розово-фиолетовое.
Внимание!Присутствие даже небольших количеств воды в пробирке может помешать протеканию реакции, так как в водных условиях хлорид сурьмы (III легко превращается в хлороксид сурьмы, который не реагирует с ретинолом, вызывая помутнение раствора. Для устранения следов влаги в пробу можно добавить 1-2 капли уксусного ангидрида.
2. Реакция на витамин D
Среди витаминов группы D наиболее распространены эргокальциферол и холекальциферол.
а) Анилиновая проба на витамин D
При нагревании рыбьего жира, содержащего витамин D, с анилиновым реактивом раствор приобретает красную окраску.
Ход работы. В сухую пробирку вносят 1 каплю рыбьего жира, 5 капель хлороформа и тщательно встряхивают. Затем добавляют 1 каплю анилинового реактива, содержащего 15 частей анилина и 1 часть концентрированной соляной кислоты. Смесь осторожно при помешивании нагревают до кипения и кипятят примерно 30 секунд. При наличии витамина D желтая эмульсия сначала становится зеленой, а затем красной. При стоянии эмульсия через 1-2 минуты расслаивается, при этом нижний слой окрашен в интенсивно красный цвет.
б) Бромхлороформенная проба на витамин D
При смешивании рыбьего жира, содержащего витамин D, с раство-ром брома в хлороформе смесь окрашивается в зеленовато-голубой цвет.
Ход работы. В сухой пробирке смешивают 2 капли рыбьего жира и 4 капли раствора брома в хлороформе (1:60). Смесь постепенно приобретает зеленовато-голубую окраску.
в) Реакция витамина D с хлоридом сурьмы (V)
При прибавлении к витамину D насыщенного раствора SbCl5 смесь окрашивается в желтый цвет.
Ход работы. В сухой пробирке смешивают 6-10 капель витамина D и 1,5 мл хлороформа, добавляют 0,2 мл насыщенного раствора хлорида сурьмы (V) и тщательно перемешивают. Наблюдают появление желтого окрашивания. 3. Реакция на витамин Е
Витамины группы Е (токоферолы) являются производными токола, самый активный из них -токоферол. Качественные реакции на -токоферол обусловлены окислением его в -токоферилхинон, окрашенный в красный цвет.
а) Реакция -токоферола с концентрированной азотной кислотой
При прибавлении к -токоферолу концентрированной азотной кислоты раствор окрашивается в оранжевый или красный цвет.
Ход работы. В сухую пробирку вносят 5 капель 0,1%-го спиртового раствора -токоферола и 10 капель концентрированной азотной кислоты. Содержимое пробирки встряхивают, появляется красное окрашивание. Если образовавшуюся окрашенную эмульсию поместить в водяную баню при 70 о С, она расслаивается, при этом верхний масляный слой имеет красный цвет.
б) Реакция -токоферола с хлоридом железа (III
Добавление к -токоферолу хлорида железа (FeCl3) вызывает появление красной окраски .
Ход работы. 4-5 капель 0,1%-го спиртового раствора -токофе-рола смешивают с 0,5 мл 1%-го раствора хлорного железа. Смесь тщательно перемешивают и наблюдают появление красного окрашивания. 4. Реакция на витамин К
Витамины группы К являются производными метилнафтохинона. Высокой витаминной активностью обладает искусственно синтезированный аналог витамина К1 викасол.
а) Реакция с цистеином
Викасол в присутствии цистеина в щелочной среде окрашивается в желтый цвет.
Ход работы. В пробирку вносят 10 капель 0,1%-го спиртового раствора викасола, 5 капель 0,025%-го раствора цистеина и 2 капли 10%-го раствора гидроксида натрия. Содержимое пробирки перемешивают и наблюдают появление желтого окрашивания. б) Реакция с анилином
При взаимодействии витамина К с анилином образуется соединение, окрашенное в красный цвет. Например:
Ход работы. В пробирку вносят 5 капель 0,2%-го спиртового раствора менадиона (приготовленного на этаноле), 2 капли анилина и перемешивают. Смесь окрашивается в красный цвет.
в) Реакция с диэтилмалоновым эфиром
Спиртовой раствор витамина К в щелочной среде с диэтил-малоновым эфиром дает красно-фиолетовое окрашивание.
Ход работы. В пробирку наливают 2 мл 0,1%-го спиртового раствора викасола, 0,5 мл 1%-го раствора диэтилмалонового эфира и 0,1 мл (2 капли) 1%-го раствора гидроксида калия. Развивается красно-фиолетовое окрашивание. г) Реакция с диэтилдитиокарбаматом
Спиртовой раствор витамина К в щелочной среде в присутствии диэтилдитиокарбамата образует соединение, окрашенное в голубой цвет.
,
,
