Взаимодействие витамина в1 с диазореактивом

Взаимодействие витамина в1 с диазореактивом

В состав молекулы витамина входят два гетероцикла — пиримидиновый и тиазоловый, связанные метиленовой группой. Кроме того, в молекуле тиамина содержатся гидроксильная и аминная группы.

В тканях организма животных тиамин превращается в пирофосфорный эфир — тиаминпирофосфат, являющийся коферментом одного из важнейших ферментов углеводного обмена — карбоксилазы.

Витамин хорошо растворяется воде, плохо- в этиловом спирте, нерастворим в хлороформе, диэтиловом эфире и других органических растворителях.

Наиболее активна в молекуле тиамина его тиазоловая часть. Азот тиазолового кольца способен к образованию четвертичных аммониевых солей. Спиртовая группа сравнительно легко вступает с кислотами в реакцию этерификации. Тиамин устойчив в кислой среде (pH 3,0), разрушается в нейтральной и щелочной. При сильнощелочной реакции происходит разрыв тиазолового кольца и превращение тиамина в тиольную форму, не обладающую витаминными свойствами. Окислители (например, железосинеродистый калий) приводят (в присутствии щелочи) также к образованию тиольной формы (тио-хрома).

Витамин распространен в растительных и животных продуктах. Особенно богаты им зерновые продукты, дрожжи, орехи; содержится он также в печени, почках, сердце, нежирном мясе и мясных продуктах.

Суточная потребность взрослого человека в тиамине составляет 2—3 мг (в зависимости от затраты труда и физиологического состояния организма), детей — 1—2 мг, грудных детей (до 1 года) — 0,5 мг.

Недостаток витамина в организме вызывает глубокие нарушения углеводного обмена, что ведет к тяжелому заболеванию периферической нервной системы (полиневриту), расстройствам функций сердечно-сосудистой системы и органов пищеварения.

Качественные реакции на витамин B1.

Тиохромная реакция. Тиамин в щелочной среде окисляется железосинеродистьщ калием в тиохром, обладающий голубой флуоресценцией в ультрафиолетовом свете

Реактивы: а) тиаминбромид, в порошке; б) железосинеродистый калий (феррицианид калия раствор; в) едкий натр, 10%-ный раствор; г) бутиловый или изоамиловый спирт.

Немного порошка тиаминбромида (приблизительно 10 мг) растворяют в 5 мл воды, прибавляют 1 мл 5%-ного раствора железосинеродистого калия, 1 мл 10%-ного раствора едкого натра, 5 мл бутилового (или изоамилового) спирта. Пробирку (или стаканчик) хорошо встряхивают и оставляют на несколько минут. Верхний, спиртовой слой осторожно сливают в пробирку из нефлуоресцирующего стекла и рассматривают в лучах ртутно-кварцевой лампы (в темном помещении). Хорошо заметна голубая или синяя флуоресценция.

Диазореакция на витамин Тиамин, реагируя с диазобензолсульфоновой кислотой, образует соединение, окрашенное в розовый или красный цвет.

Реактивы: а) тиаминбромид, в порошке; б) диазореактив: 0,9 г сульфаниловой кислоты растворяют в 9 мл концентрированной соляной кислоты (в мерной колбе на 100 мл) и раствор доливают водой до метки. Солянокислый раствор сульфаниловой кислоты довольно устойчив. Его хранят в склянке из темного стекла с притертой пробкой. Непосредственно перед анализом готовят диазореактив, для чего 1,5 мл основного раствора переносят в мерную колбу на 50 мл (установленную в сосуде со льдом или снегом, или в холодильнике) и добавляют 1,5 мл только что приготовленного 5%-ного раствора азотистокислого натрия Через 5 мин. прибавляют еще 6 мл раствора азотистокислого натрия и через 1—2 мин. доливают до метки охлажденной водой. Колбу взбалтывают и оставляют в ледяной ванне или холодильнике еще в течение 15—20 мин. Диазореактив можно сохранять в холодильнике или на льду (не более одних суток!); в) карбонатно-щелочной раствор:

перед употреблением смешивают равные объемы 4%-ного раствора едкого натра и 5,76%-ного раствора двууглекислого натрия.

К 2 мл карбонатно-щелочного раствора добавляют 1 мл диазореактива и 1—2 мг порошка тиаминбромида (на кончике скальпеля). Вначале появляется желтое окрашивание, которое через 1—2 мин. переходит в розовое или красное.

Источник

Диазореакция на тиамин (витамин в1)

Недостаток тиамина в пище вызывает заболевание бери-бери, связанное с поражениями нервной системы, сердечно-сосудистой системы и желудочно-кишечного тракта.

Биологическая роль тиамина хорошо известна – в виде тиаминпирофосфата он выполняет коферментные функции в реакциях декарбоксилирования α-кетокислот и в транскетолазной реакции.

Принцип метода. Раствор тиамина при добавлении к нему деазореактива и щелочи окрашивается в оранжевый или красный цвет вследствие образования сложного соединения тиамина с диазобензосульфокислотой.

Ход определения. К 5 каплям 1%-ного раствора сульфаниловой кислоты прибавляют 5 капель 5%-ного раствора нитрата натрия, получают диазореактив. К диазореактиву прибавляют небольшое количество порошка тиамина и 5-7 капель 10%-ного раствора карбоната натрия. Жидкость окрашивается в оранжевый или красный цвет.

Реакция восстановления рибофлавина (витамин в2)

Принцип метода. Рибофлавин обладает окислительно-восстановительными свойствами. Физиологическая роль витамина В2 выяснилась, когда было установлено, что рибофлавин входит в состав коферментов ФАД и ФМН, являющихся простетической группой ряда ферментов, относящихся к классу оксидоредуктаз.

Реакция обусловлена восстановлением рибофлавина выделяющимся моноводородом сначала в родофлавин (промежуточное соединение красного цвета), а затем в бесцветную лейкоформу:

рибофлавин (окисленная форма) рибофлавин (восстановленная форма)

Ход определения. В пробирку наливают 10 капель взвеси рибофлавина в воде, добавляют 5 капель концентрированной соляной кислоты и опускают гранулу металлического цинка. Выделяющийся в ходе реакции водород взаимодействует с рибофлавином: раствор приобретает постепенно розовую окраску, затем обесцвечивается.

Качественные реакции на ниацин (витамин рр, никотиновая кислота, никотинамид)

Принцип метода. Биологическая функция ниацина заключается в том, что никотинамид служит активной частью коферментов НАД+ или НАДФ+, участвующих в окислительно-восстановительных реакциях. РР-авитаминоз выражается в виде дерматита на симметричных участках тела, расстройствах деятельности желудочно-кишечного тракта, нервной системы.

Ход определения. 1. Качественная реакция ниацина с медью. Щепотку порошка (5-10 мг) витамина РР растворяют при нагревании в 10-20 каплях 10%-ного раствора уксусной кислоты. К нагретому до кипения раствору добавляют равный объем 5%0ного раствора ацетата меди. Жидкость становится мутной, при стоянии выпадает осадок синего цвета.

Определение общего билирубина в сыворотке крови

(Метод Иендрашика и Клеггорна)

Принцип метода. Билирубин образуется в организме в результате естественного распада гемоглобина эритроцитов в клетках ретикуло-эндотелиальной системы (печень,селезенка). Билирубин относится к группе желчных пигментов и является токсическим веществом; он обезвреживается в клетках печени. Транспортируется билирубин к месту обезвреживания в комплексе с белком. В печени происходит процесс обезвреживания по схеме:

билирубин + УДФ-глюкуроновая кислота билирубин (моно- и диглюкуроид)

Глюкурониды билирубина хорошо растворимы, они выводятся из печени по желчевыводящим путям.

В сыворотке крови содержится два вида билирубина: нерастворимый (в виде комплекса с белками, обеспечивающими транспорт) и растворимый (диглюкуронид ). Вместе обе формы составляют общий билирубин.

Определение содержания билирубина в крови является важным диагностическим тестом. Билирубин обычно содержится в крови в небольших количествах-0,5-1,2 мг/дл, причем 75% из них составляет билирубин, связанный с белками (нерастворимый).

При различных поражениях печени и желтухах часто наблюдается гипербилирубинемия, концентрация билирубина повышается до 30-35 мг/дл.

Метод основан на колориметрическом определении интенсивности окраски продукта взаимодействия билирубина с диазореактивом. Этот продукт окрашен в малиново-красный цвет. Билирубиндиглюкуронид реагирует с диазосмесью непосредственно.

Связанный с белками билирубин реагирует с диазосмесью после диссоциации белкового комплекса, которая достигается прибавлением к сыворотке кофеинового реактива.

Ход определения. Готовят две пробирки (контрольную и опытную). Составляют реакционную смесь по схеме:

Источник

Лабораторная работа №21 качественные реакции на жирорастворимые витамины

Витамин А. Если рыбий жир содержит витамин А, то при добавлении серной кислоты, обладающей водоотнимающим свойством, возникает фиолетово-красное окрашивание, быстро переходящее в бурое.

Витамин D. Витамин D при взаимодействии с анилиновым реактивом при нагревании окрашивается в красный цвет.

Витамин Е. Спиртовой раствор витамина Е в присутствии концентрированной азотной кислоты окисляется в хиноидное соединение, окрашенное в красный цвет.

Витамин К. Витамины этой группы обладают группы выраженным антигеморрагическим действием. Обнаруживают по цветной реакции с щелочным раствором цистеина.

РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ:

1) раствор рыбьего жира в обезвоженном хлороформе; 2) масляный раствор эргокальциферола — 1,25 г/л; 3) витамин Е, 0,1 % спиртовой раствор; 4) викасол, 0,1 % спиртовой раствор; 5) H₂SO₄, конц.; 6) НNO₃, конц.; 7) сахароза в порошке; 8) анилиновый реактив (15 частей анилина и 1 часть концентрированной соляной кислоты); 9) хлороформ; 10) цистеин, 0,025 %; 11) NaOH, 10 %; 12) часовое стекло или чашка Петри; пробирки; пипетки обычные и глазные; держатели; спиртовки.

1. Качественная реакция на витамин А. На сухое стекло наносят 5 капель раствора рыбьего жира в хлороформе и 1 каплю концентрированной серной кислоты. Образуется красно-фиолетовое окрашивание.

Результат занести в таблицу 18.

2. Качественная реакция на витамин D. В сухую пробирку вносят 2 капли масляного раствора эргокальциферола, 10 капель хлороформа и 1-2 капли анилинового реактива, осторожно нагревают при постоянном помешивании. Отмечают результат реакции.

Результат занести в таблицу 18.

3. Качественная реакция на витамин Е. В сухую пробирку вносят 6 капель 0,1 % раствора витамина Е. Затем туда добавляют несколько крупинок сахарозы и 10 капель концентрированной HNO₃ (осторожно по стенке пробирки!). Пробирки слегка встряхивают. Через 1-2 мин наблюдают развитие окрашивания.

Результат занести в таблицу 18.

4. Качественная реакция на витамин К. В сухую пробирку наливают 1мл 0,1% спиртового раствора викасола, добавляют 2 капли 0,025 % раствора цистеина и 2 капли 10 % раствора NaOH. Наблюдают за развитием окрашивания.

Результат занести в таблицу 18.

Лабораторная работа №22 качественные реакции на витамины группы в

Витамин В₁. В щелочной среде тиамин с диазореактивом образует сложное комплексное соединение оранжевого цвета.

Витамин В₂. Окисленная форма витамина В₂ представляет собой желтое флюоресцирующее в ультрафиолетовых лучах вещество. Реакция на витамин В₂ основана на его способности легко восстанавливаться; при этом раствор витамина В₂, имеющий желтую окраску, приобретает сначала розовый цвет (за счет образования промежуточных соединений), а затем обесцвечивается (восстановленная форма витамина В₂ бесцветна).

Витамин В₅ (РР). Витамин РР при нагревании с раствором ацетата меди образует плохо растворимый синий осадок медной соли никотиновой кислоты.

Витамин В₆. Витамин В₆ при взаимодействии с раствором хлорного железа образует комплексную соль типа фенолята железа красного цвета.

РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ:

1) витамина В₁, 5 %; 2) витамин В₂, 0,025 % раствор (перед определением раствор можно развести в 5 раз); 3) витамин РР, 3 % раствор в 10 % растворе уксусной кислоты; 4) витамин В₆, 1 %; 5) сульфаниловая кислота, 1 %; 6) NaNО₂, 5 %; 7) Na₂CO₃, 10 %; 8) HCl, конц.; 9) металлический цинк; 10) FeCl₃, 1 %; 11) (CH₃COO)₂Cu, 5 %; 12) сухие пробирки, держатели, спиртовки; 13) флуороскоп.

1. Качественная реакция на витамин В₁. В пробирку к 5 каплям 1 % раствора сульфаниловой кислоты добавляют 5 капель 5 % раствора NaNО₂. К полученному диазореактиву добавляют 2 капли 5 % раствора витамина В₁ и 5-7 капель 10 % раствора Na₂СО₃ (осторожно по стенке пробирки !). На границе двух жидкостей появляется кольцо оранжевого цвета.

Результат занести в таблицу 19.

2. Качественная реакция на витамин В₂. В пробирку приливают 10 капель раствора витамина В₂, добавляют туда 5 капель концентрированной HCl. В пробирку опускают 1 горошинку металлического цинка. Начинается выделение пузырьков водорода, жидкость постепенно розовеет, затем обесцвечивается. Сравнивают обе формы витамина В₂ по флюоресценции, поместив пробирки у флуороскопа.

Результат занести в таблицу 19.

3. Качественная реакция на витамин В₅ (РР). Перед определением раствор витамина РР взбалтывают! В пробирку вносят 20 капель витамина РР. Нагревают до кипения. Взбалтывают раствор ацетата меди (!) и прибавляют 20 капель его к нагретому раствору. Содержимое пробирки доводят до кипения и охлаждают под струей холодной воды. Наблюдают выпадение осадка медной соли никотиновой кислоты.

Результат занести в таблицу 19.

4. Качественная реакция на витамин В₆. В пробирку вносят 5 капель 1 % раствора витамина В₆ и добавляют 5 капель 1 % раствора хлорного железа. Пробирки встряхивают. Наблюдают развитие окрашивания.

Источник