Качественные реакции на водорастворимые витамины
Опыт 1. Обнаружение витамина В1 (тиамин) в сером и белом хлебе.
Витамин Вi состоит из пиримидинового и тиазолового колец. Витамин Вi получил название тиамина, поскольку содержит серу и азот.
|
 | |
|
Тиаминпирофосфат (коферментная форма тиамина) синтезируется в печени путем прямого переноса пирофосфата от АТФ, а в других тканях – ТТФ (тиамин-трифосфат).
Тиаминпирофосфат участвует в окислительном декарбоксилировании а-кетокислот и в транскетолазной реакции, входя в состав ферментов, участвующих в углеводном обмене.
Недостаток витамина В1 в пище вызывает поражение периферической нервной системы, известное под названием «бери–бери». При этом накапливаются пировиноградная кислота и другие α — кетокислоты.
Для анализа берут водную вытяжку из серого и белого хлеба и готовят в пробирке диазореактив (в пробирке смешивают 0,5 мл 1% раствора сульфаниловой кислоты и 0,5 мл 5% раствора азотистокислого натрия, т. е. нитратом натрия).
сульфаниловая диазобензолсульфоновая кислота кислота
Затем диазобензолсульфоновая кислота реагирует в щелочной среде с тиамином с образованием окрашенного азосоединения:
тиами + ½ ¾¾¾¾¾¾¾® + H2O + NaOH R— N=N—R
+ N º N оранжево-красного цвета
Тиамин, реагируя в щелочной среде с диазореактивом, образует соединение красного цвета.
Порядок выполнения работы.
В две пробирки помещают по 0,5 мл диазореактива. Затем в первую пробирку добавляют 0,5 мл водной вытяжки из серого, а во вторую 0,5 мл водной вытяжки из белого хлеба. Содержимое пробирок перемешивают и в обе вносят по 0,3 — 0,5 мл 10% бикарбоната натрия.
Вывод: записать результаты опыта.
Опыт 2. Обнаружение витамина В6 (пиридоксин) в сером и белом хлебе.
Витамин В6 – собирательное название производных 3-гидрокси-2-метилпиридинов. На самом деле представляет собой группу витаминов: пиридоксин, пиридоксаль и пиридоксамин, которые тесно связаны между собой и действуют совместно. В форме кофермента — пиридоксальфосфата (ПАЛФ) входит в состав т. н. пиридоксалевых ферментов, катализирующих переаминирование, декарбоксилирование и др. превращения аминокислот в организмах, а также в состав фосфорилазы гликогена. Синтезируются микроорганизмами, зелёными растениями, у жвачных и человека – кишечной микрофлорой. Недостаток B6 вызывает анемию, дерматит и судороги.
Структурная формула витамина В6
R: пиридоксин (пиридоксол, адермин, I), пиридоксаль (II) и пиридоксамин (III)
В присутствии хлорного железа растворы, содержащие пиридоксин, приобретают красную окраску.
Порядок выполнения работы.
В одну пробирку помещают 1 мл водной вытяжки из серого хлеба, во вторую – 1 мл водной вытяжки из белого хлеба. В обе пробирки добавляют по 1-2 капли 5% раствора хлорного железа, встряхивают.
Вывод: записать результаты эксперимента.
Заключение по опытам 1 и 2: сравнив интенсивность окраски растворов, полученных при анализе водной вытяжки из серого и белого хлеба, установить, какой хлеб богаче витаминами В1 и В6.
Опыт 3. Качественная реакция на витамин В2.
Рибофлавин состоит из изоаллоксазинового ядра и спирта рибитола. Рибофлавин входит в состав простетической группы флавиновых ферментов – флавопротеидов в виде коферментов флавинадениндинуклеотида (ФАД) и флавинаденинмононуклеотида (ФМН). Флавопротеиды активируют реакции дегидрирования, т. е. отщепления протонов и электронов от субстратов. Они участвуют в окислении D-аминокислот, β-оксикетокислот, НАДН (Н+), в биологическом окислении и др.
Биологическое действие флавиновых ферментов связано с наличием в изоаллоксазиновом кольце двойных связей: флавиновый фермент отнимает от окисляемой молекулы два электрона, присоединяя их к азоту по месту двойных связей, и два протона.
При недостатке в организме витамина В2 могут возникнуть, например, катаракта (помутнение хрусталика) и другие заболевания.
Рибофловин, окисленный (жёлтый) Рибофловин, восстановленный (бесцветный)
Принцип метода. Окисленная форма витамина В2 представляет собой желтое флюоресцирующее в ультрафиолетовых лучах вещество. Реакция на витамин В2 основанная на способности его легко восстанавливаться; при этом раствор витамина В2, обладающий желтой окраской, приобретает сначала розовый цвет за счет образования промежуточных соединений, а затем обесцвечивается, так как восстановленная форма витамина В2 бесцветна.
Источник
Лабораторная работа № 4 Качественные реакции на водорастворимые витамины
Опыт 1. Обнаружение витамина В1 (тиамин) в сером и белом хлебе.
Витамин Вi состоит из пиримидинового и тиазолового колец. Витамин Вi получил название тиамина, поскольку содержит серу и азот.
Тиаминпирофосфат (коферментная форма тиамина) синтезируется в печени путем прямого переноса пирофосфата от АТФ, а в других тканях – ТТФ (тиамин-трифосфат).
Тиаминпирофосфат участвует в окислительном декарбоксилировании а-кетокислот и в транскетолазной реакции, входя в состав ферментов, участвующих в углеводном обмене.
Недостаток витамина В1 в пище вызывает поражение периферической нервной системы, известное под названием «бери–бери». При этом накапливаются пировиноградная кислота и другие α — кетокислоты.
Для анализа берут водную вытяжку из серого и белого хлеба и готовят в пробирке диазореактив (в пробирке смешивают 0,5 мл 1% раствора сульфаниловой кислоты и 0,5 мл 5% раствора азотистокислого натрия, т. е. нитратом натрия).
сульфаниловая диазобензолсульфоновая кислота кислота
Затем диазобензолсульфоновая кислота реагирует в щелочной среде с тиамином с образованием окрашенного азосоединения:
т
иами + + H2O + NaOH R— N=N—R
+ N N оранжево-красного цвета
Тиамин, реагируя в щелочной среде с диазореактивом, образует соединение красного цвета.
Порядок выполнения работы.
В две пробирки помещают по 0,5 мл диазореактива. Затем в первую пробирку добавляют 0,5 мл водной вытяжки из серого, а во вторую 0,5 мл водной вытяжки из белого хлеба. Содержимое пробирок перемешивают и в обе вносят по 0,3 — 0,5 мл 10% бикарбоната натрия.
Вывод: записать результаты опыта.
Опыт 2. Обнаружение витамина В6 (пиридоксин) в сером и белом хлебе.
Витамин В6 – собирательное название производных 3-гидрокси-2-метилпиридинов. На самом деле представляет собой группу витаминов: пиридоксин, пиридоксаль и пиридоксамин, которые тесно связаны между собой и действуют совместно. В форме кофермента — пиридоксальфосфата (ПАЛФ) входит в состав т. н. пиридоксалевых ферментов, катализирующих переаминирование, декарбоксилирование и др. превращения аминокислот в организмах, а также в состав фосфорилазы гликогена. Синтезируются микроорганизмами, зелёными растениями, у жвачных и человека – кишечной микрофлорой. Недостаток B6 вызывает анемию, дерматит и судороги.
Структурная формула витамина В6
R: пиридоксин (пиридоксол, адермин, I), пиридоксаль (II) и пиридоксамин (III)
В присутствии хлорного железа растворы, содержащие пиридоксин, приобретают красную окраску.
Порядок выполнения работы.
В одну пробирку помещают 1 мл водной вытяжки из серого хлеба, во вторую – 1 мл водной вытяжки из белого хлеба. В обе пробирки добавляют по 1-2 капли 5% раствора хлорного железа, встряхивают.
Вывод: записать результаты эксперимента.
Заключение по опытам 1 и 2: сравнив интенсивность окраски растворов, полученных при анализе водной вытяжки из серого и белого хлеба, установить, какой хлеб богаче витаминами В1 и В6.
Рибофлавин состоит из изоаллоксазинового ядра и спирта рибитола. Рибофлавин входит в состав простетической группы флавиновых ферментов – флавопротеидов в виде коферментов флавинадениндинуклеотида (ФАД) и флавинаденинмононуклеотида (ФМН). Флавопротеиды активируют реакции дегидрирования, т. е. отщепления протонов и электронов от субстратов. Они участвуют в окислении D-аминокислот, β-оксикетокислот, НАДН (Н+), в биологическом окислении и др.
Биологическое действие флавиновых ферментов связано с наличием в изоаллоксазиновом кольце двойных связей: флавиновый фермент отнимает от окисляемой молекулы два электрона, присоединяя их к азоту по месту двойных связей, и два протона.
При недостатке в организме витамина В2 могут возникнуть, например, катаракта (помутнение хрусталика) и другие заболевания.
Рибофловин, окисленный (жёлтый) Рибофловин, восстановленный (бесцветный)
Принцип метода. Окисленная форма витамина В2 представляет собой желтое флюоресцирующее в ультрафиолетовых лучах вещество. Реакция на витамин В2 основанная на способности его легко восстанавливаться; при этом раствор витамина В2, обладающий желтой окраской, приобретает сначала розовый цвет за счет образования промежуточных соединений, а затем обесцвечивается, так как восстановленная форма витамина В2 бесцветна.
Источник
Часть 2. Качественные реакции на водорастворимые витамины
1. Качественные реакции на витамин В1
Витамин В1 (тиамин, анейрин)
Витамин В1 (солянокислый) — бесцветные кристаллы в виде игл, растворимые в воде, спирте, кислотах, и нерастворимые в эфире и хлороформе. В кислой среде В1 устойчив к действию высокой температуры, а в щелочной среде легко разрушается. Длительное время он сохраняется в сушеных овощах и фруктах. При В1 — авитаминозе развивается полиневрит (болезнь «бери-бери»). Это заболевание состоит в прогрессирующей дегенерации нервных окончаний и проводящих пучков, следствием чего являются потеря кожной чувствительности, нарушение нормальной моторики желудочно-кишечного тракта, сердечные боли вплоть до наступления паралича и смерти. Витамин В1 содержит тиазольное и пиримидиновое кольцо:
Диазореакция на витамин В1.
В основе этого метода обнаружения лежит способность тиамина образовывать в щелочной среде с диазореактвом (диазосульфаниловой кислотой) комплекс оранжево-красного цвета.
Диазореактив готовят, сливая в пробирку по 5 капель 1%-ного раствора сульфаниловой кислоты и 5%-ного раствора нитрита натрия. В эту же пробирку добавляют на кончике скальпеля порошок тиамина и затем по стенке наклоненной пробирки осторожно приливают 5-7 капель 10%-ного раствора карбоната натрия. На границе двух жидкостей появляется кольцо оранжево-красного цвета.
Обнаружение витамина В1 в молоке
К 1 мл молока добавьте 10 капель диазореактива и 7 капель раствора карбоната натрия. Наблюдайте за изменением окраски раствора и сделайте вывод о присутствии витамина в молоке.
Взаимодействие витамина В1 с гексацианоферратом (III) калия
К раствору тиамина приливают 1 мл 5% раствора гексацианоферрата (III) калия, 1 мл 30% раствора щелочи и полученный раствор перемешивают. Далее к полученной смеси приливают 3 мл изобутилового спирта, полученный раствор хорошо взбалтывают. Верхний спиртовой слой при помощи капилляра или микропипетки переносят в сухую пробирку и наблюдают голубую флюоресценцию раствора в ультрафиолетовых лучах. Смесь в пробирке при перемешивании нагревают на водяной бане. Наблюдают появление желтой окраски.
2.Качественные реакции на витамин В2
Окисленная форма витамина В2 представляет собой желтое флюоресцирующее в ультрафиолетовых лучах вещество. Реакция на витамин В2 основана на его способности легко восстанавливаться. При этом раствор приобретает сначала розовый цвет промежуточных соединений, а затем обесцвечивается, т.к. восстановленная форма витамина В2 бесцветна.
В пробирку наливают 10 капель раствора витамина В2, добавляют 5 капель конц. соляной кислоты и опускают гранулу металлического цинка. Начинается выделение пузырьков водорода, жидкость постепенно розовеет, затем обесцвечивается.
3.Качественные реакции на витамин В6
Витамин В6 (пиридоксин, адермин)
Активностью витамина В6 обладает группа веществ, производных пиридина и носящих общее название пиридоксин:
К ним относятся, отличающиеся только характером радикала в 4-м положении пиридинового цикла, пиридоксол (R = СН2ОН), пиридоксаль (R = СНО) и пиридоксамин (R = СН2NН2). Свободные основания и гидрохлориды этих соединений представляют собой кристаллические порошки горьковатого вкуса, хорошо растворимые в воде, хуже — в спирте и нерастворимые в эфире и хлороформе. Лекарственная форма витамина В6 -монохлоргидрат пиридоксола — растворим в воде и спирте, выдерживает нагревание в растворах минеральных кислот и щелочей, в нейтральной и щелочной средах легко разлагается на свету. Сильные окислители разрушают eго.
Недостаточность витамина В6 у человека встречается крайне редко, так как он широко распространен в продуктах питания. У животных авитаминоз В6 проявляется отечной формой дерматита на мордочке, лапках и хвосте, а также гипохромной анемией и поражением нервной системы. Это вызвано нарушением обмена белков и липидов, что ведет к нарушению кроветворения и развитию дерматитов, которые не лечатся никотиновой кислотой, а также к атеросклерозу.
Феррихлоридная проба на витамин В6
Бесцветный раствор витамина В6 приобретает красную окраску в присутствии хлорного железа. Реакция обусловлена образованием комплексной соли красного цвета типа фенолята железа.
В пробирке смешивают 5 капель 5%-го водного раствора витамина В6 и 1 каплю 5%-го раствора хлорного железа и встряхивают ее. Смесь окрашивается в красный цвет.
Организация стока поверхностных вод: Наибольшее количество влаги на земном шаре испаряется с поверхности морей и океанов (88‰).
Общие условия выбора системы дренажа: Система дренажа выбирается в зависимости от характера защищаемого.
Папиллярные узоры пальцев рук — маркер спортивных способностей: дерматоглифические признаки формируются на 3-5 месяце беременности, не изменяются в течение жизни.
Источник