Функциональные пробы определения гиповитаминоза с
Определение резистентности капилляров.
Выполняется с помощью прибора Нестерова или вакуумного ртутного манометра Матуссиса (рис. 24.1) с миллиметровой шкалой и присоединенных к нему с помощью резиновой трубки воронки с внутренним диаметром 15,8 мм и груши (с обратным клапаном) или шприца Жане для отсоса воздуха. Край воронки смазывают вазелином и располагают на внутренней поверхности предплечья на 1,5-2 см ниже локтевой ямки человека, которого обследуют. Создают отрицательное давление 200 мм рт. ст. и удерживают его в течение 2 минут. Количество петехий подсчитывают с помощью лупы, прижав к месту исследования предметное стекло (при этом кожа бледнеет и лучше видно петехии). Результаты пробы оценивают по таблице:
Степень снижения прочности капилляров
Выраженность гиповитаминоза С
Гипо- и авитаминоз
Языковая проба с реактивом Тильманса.
Готовят 0,06% раствор реактива Тильманса (2,6-дихлорфенол-индофенол, синего цвета). На середину языка с помощью микропипетки на 0,1 мл с наконечником из инъекционной иглы диаметром 0,2 мм наносят 0,007 мл раствора реактива (капля с просяное зерно) и с помощью секундомера определяют время его обесцвечения. При отсутствии С-гиповитаминоза реактив Тильманса обесцвечивается за 22-23 секунды. Языковую пробу целесообразно проводить натощак за час до приема пищи.
Внутрикожная проба с реактивом Тильманса.
Раствор реактива указанной концентрации стерилизуют кипячением. Одноразовым шприцем с тонкой инъекционной иглой вводят внутрикожно небольшое количество реактива до появления папулы размером с просяное зернышко. Время обесцвечения реактива при отсутствии гиповитаминоза С не превышает 5 минут.
4. Определение аскорбиновой кислоты в часовом количестве утренней мочи по Железняковой:утром, натощак, рекомендуют освободиться от ночной мочи, отмечают время до следующего мочеиспускания, измеряют количество мочи, рассчитывают, сколько мочи образуется за один час, и в этом объеме мочи химическим методом определяют содержание аскорбиновой кислоты.
Оценка: если за 1 час выделяется 0,8 мг – насыщенность организма витамином С достаточная; 0,4-0,79 мг – удовлетворительная; 0,39 мг и меньше – недостаточная.
Определение темновой адаптации как признака гиповитаминозов а и в2
Наиболее ранним симптомом гиповитаминоза А и, частично, В2 является гемералопия – нарушения темновой адаптации и ощущения цветов, в первую очередь желтого, обусловленное обеднением палочек сетчатки глаза зрительным пурпуром, в образовании которого принимает участие витамин А.
Для определения темновой адаптации используют специальные приборы – адаптометры, среди которых наиболее часто используют адаптометр Кравкова-Вишневского и адаптометр медицинский АДМ (рис. 24.2). Адаптометр представляет собой прямоугольную или шаровидную камеру с зашторенными отверстиями для глаз исследуемого, белой расцветкой внутренней поверхности и окрашенными в разные цвета фигурами (квадраты, кресты, круги и тому подобное).
Адаптометрия основана на определении времени, необходимого зрительному анализатору для выполнения своей функции при переходе от высокого уровня освещенности (которое обеспечивается включением на 2 минуты специальной лампы при экранировании цветных фигур специальным белым экраном) к низкому (сумеречному). Для этого осветительная лампа выключается, а белый экран в адаптометре отводится в сторону, открывая цветные фигуры. При этом включается секундомер.
Подопытному предлагается фиксировать зрение на красной точке, которая светится в верхнем секторе адаптометра, и извещать, когда он увидит ту или иную цветную фигуру. Лица с нормальным сумеречным зрением видят цветную фигуру не позже 50-55 сек. (84% людей видят фигуру даже через 35-36 сек.). Увеличение этого времени свидетельствует о наличии гемералопии, а значит – гиповитаминоза А.
Детали работы с адаптометрами изложенны в инструкциях к ним.
Источник
Методы определения с-витаминной недостаточности.
Эпителиальная или капиллярная проба.
Все методы определения С-витаминной недостаточности должны применяться комплексно и сопровождаться тщательным врачебным наблюдением (массовое исследование однородных по полу, возрасту ироду деятельности коллективов, находящихся на регламентированном питании). Методы годны лишь для групповой оценки питания коллектива в отношении обеспечения рациона витамином С. В качестве контроля при проведении этих проб целесообразно пользоваться определением витамина в крови. Физиологической нормой витамина С в крови принято считать 0,7 – 1,0 мг %.
Проба нагрузок.
Современный метод нагрузок основан на следующих экспериментально доказанных данных:
Человек ежедневно с суточной порцией мочи выделяет 20 – 50 мг аскорбиновой кислоты.
При полном или частичном выключении из пищи витамина С выделение его уменьшается или прекращается. Последнее происходит не сразу, а постепенно, что указывает на наличие в тканях некоторого резерва витамина С.
При приеме человеком внутрь массивных доз аскорбиновой кислоты (200-300 мг), ее концентрация в моче резко повышается. Это явление наблюдается у детей, получавших с пищей достаточное количество аскорбиновой кислоты и не встречается, если диета содержала мало витамина С.
Организм считается «насыщенным» витамином С с момента, когда в порции мочи, взятой через 4 – 7 часов после приема витамина, находим не менее 15 – 20 мг аскорбиновой кислоты. День, когда концентрация аскорбиновой кислоты в моче достигает 15 – 20 мг%, покажет момент «насыщения», который должен наступить (в норме) не позднее 4 суток от начала нагрузки.
Капиллярная (эндотелиальная) проба.
Витамин С имеет существенное значение для правильного функционирования капиллярной системы организма. Поэтому при отсутствии или недостатке в пище аскорбиновой кислоты наблюдаются нарушения капилляров, а именно повышение проницаемости их стенки. Это один из самых ранних симптомов С-витаминной недостаточности и на этом основан метод.
Испытание резистентности производится под искусственно создаваемым отрицательным давлении. Сущность пробы состоит в следующем: на участок кожи (обычно внутренняя поверхность локтевого сустава), подлежащей обследованию, ставится банка, из которой выкачивается воздух. Суждение о состоянии сосудистой стенки выносится на основании появления петехий на исследуемом участке кожи.
Применяемый для этого прибор представляет собой У-образный ртутный манометр со шкалой на 250 – 300 мм, соединенный Т-образной резиновой трубкой с небольшой стеклянной баночкой диаметром в 1 см. Края баночки отогнуты кнаружи и имеют гладкую поверхность. Второй, свободный конец резиновой трубки служит для отсасывания из системы воздуха, чем и создается отрицательное давление под баночкой.
Оценка результатов испытания производится на основании следующих данных, установленных практикой:
У здоровых людей, при отрицательном давлении в 200 и выше мм.рт.ст. на коже появляется не более 5 петехий.
При С-витаминной недостаточности указанное количество петехий получается при давлении в пределах 175 и ниже мм.рт.ст.
Источник
КОЖНЫЕ ПРОБЫ
Кожные пробы — диагностический метод выявления специфической сенсибилизации организма человека или животного путем введения через кожу аллергена и оценки воспалительной реакции кожи.
Кожные пробы используют для качественного и количественного исследования. В первом случае — в целях диагностики некоторых инфекционных (туберкулез, бруцеллез и др.) и паразитарных (Эхинококкоз) заболеваний и выявления сенсибилизации при аллергических заболеваниях, во втором случае — для установления порога чувствительности кожи больного путем испытания десятикратных разведений аллергенов. Таким образом вычисляют начальную дозу аллергена, необходимую для специфической гипосенсибилизации (см.).
Существуют две методики Кожных проб. Прямая методика, когда аллерген вводят без повреждения или с повреждением кожи, может быть капельной, аппликационной (эпикутанной, или лоскутной), скарификационной, пробой уколом и внутрикожной. К прямой методике относятся также холодовая и тепловая пробы. Непрямая методика — реакция пассивного переноса по Прауснитцу—Кюстнеру (см. Прауснитца—Кюстнера реакция), когда сыворотку больного с содержащимися в ней антителами вводят внутрикожно здоровому лицу с последующим введением в то же место аллергена, к к-рому чувствителен больной. Эта методика применяется, когда прямое кожное тестирование невозможно или очень опасно (напр., при анафилактическом типе повышенной чувствительности к пенициллину), а специфическая диагностика необходима.
В зависимости от времени возникновения воспалительной реакции различают К. п. немедленного (I и III типы аллергических реакций) и замедленного (IV тип аллергических реакций) типов (см. Аллергия). Механизм К. п. немедленного типа основан на том, что при сенсибилизации организма реагины фиксируются не только в тканях «шоковых» органов (см. Анафилаксия), но и в клетках кожи. При нанесении на кожу специфического аллергена (антигена) в ней происходит реакция аллерген—антитело и выделяются биологически активные вещества (см. Медиаторы аллергических реакций). Через 15—20 мин. образуется волдырь, окруженный зоной гиперемии, воспалительная реакция волдырно-эритематозного типа (I тип реакции). При реакции III типа на месте введения аллергена развиваются отек и гиперемия. Эти изменения возникают через 3—4 часа, достигают максимума через 7—8 час. и исчезают через 24 часа. К. п. III типа расцениваются как проявление аллергической реактивности типа феномена Артюса (см. Артюса феномен) и зависят от присутствия циркулирующих преципитинов. При реакциях замедленного типа, возникающих через 24—48 час. после воздействия аллергена, в формировании на месте К. п. инфильтрата принимают участие лимфоидные клетки. При взаимодействии рецепторов лимфоцитов с аллергеном из лимфоцитов выделяются медиаторы, обусловливающие развитие воспалительной реакции.
Выбор методики кожного тестирования зависит от заболевания, предполагаемой степени и вида аллергической гиперчувствительности (немедленного, замедленного), а также групповой принадлежности испытываемого аллергена. При повышенной чувствительности к простым хим. веществам, нек-рым медикаментам и т. д., выражающейся клинически контактным аллергическим дерматитом, диагностическое значение имеют только аппликационные К. п. При бронхиальной астме, аллергическом рините, поллинозах, при которых предполагается повышенная чувствительность к аллергенам небактериального происхождения, начинают исследование с пробы уколом или скарификационной пробы. При крапивнице, отеке Квинке, пищевой аллергии, мигрени выявить аллергию с помощью К. п. удается реже, т. к. они дают отрицательные результаты с целым рядом таких пищевых аллергенов, которые при употреблении per os вызывают четко выраженное заболевание. К. п. с медикаментами малодостоверны. Отрицательные К. п. не означают, что к данному аллергену нет сенсибилизации, т. к. и в таких случаях встречаются тяжелые анафилактические реакции. Бактериальные аллергены, как правило, тестируются внутрикожно (за исключением реакции Пирке). При скарификационной методике они не дают достаточно четких результатов, что обусловлено более низким по сравнению с небактериальными экстрактами содержанием специфических субстанций.
При постановке Кожной пробы необходимо учитывать неодинаковую реактивность кожи. Наиболее чувствительной является кожа передней поверхности предплечья, груди, живота, спины около позвоночника и над лопатками. На локтевой ямке реакция получается более сильной, но менее специфичной. Кожная чувствительность в период обострения болезни или сразу после нее менее выражена. При постановке К. п. общие реакции типа анафилактического шока (см.) возникают редко. Осложнения чаще наблюдаются при использовании таких сильных аллергенов, как аллергены из пыльцы растений, шерсти и эпидермиса животных, тел насекомых, сыворотки животных. Наибольшую опасность представляют медикаменты, в частности антибиотики (особенно пенициллин). Тестирование с пенициллином следует проводить в случае крайней необходимости, применяя очень большие разведения; начинают исследование с нанесения капли испытуемого р-ра на кожу и лишь при отрицательной реакции проводят скарификационную пробу. Для профилактики общих реакций типа анафилактического шока следует начинать тестирование небактериальных аллергенов со скарификационной методики, строго соблюдая все необходимые предосторожности, и только при отрицательных результатах переходить на внутрикожную. В связи с тем что между аллергической чувствительностью кожи и «шоковых» органов нет полного соответствия, при специфической диагностике аллергических заболеваний нельзя полагаться только на результаты К. п. Важное диагностическое значение К. п. приобретает тогда, когда ее результат полностью соответствует анамнестическим данным. При несоответствии данных анамнеза результатам К. п. используют другие методы исследования: in vivo — провокационные пробы (см.), in vitro — определение в крови IgE-антител методом радиоаллергосорбента, тест специфического освобождения гистамина, базофильный тест (см.) и т. д.
Капельные пробы используются для выявления сенсибилизации к медикаментам, в первую очередь к антибиотикам. Применяются невысокие концентрации веществ: 0,25% р-р новокаина, от 0,5 до 100 ЕД/мл антибиотиков, 2,5% р-р резорцина и т. д. На кожу живота или передней поверхности предплечья, предварительно обработанную 70% спиртом, наносят каплю испытуемого вещества и обводят место пробы карандашом. Параллельно ставят контрольную К. п. с растворителем. Для выявления реактивности кожи используется 0,01% р-р гистамина — положительный контроль. Учитывают немедленную (в течение 20 мин.) и замедленную (в течение 24—48 час.) реакцию. В случае положительной реакции на месте нанесения капли р-ра вещества развиваются эритема, отек, папулы и пузырьковые элементы. В случае отрицательной реакции переходят к скарификации.
Аппликационные пробы применяются при профилактике кожных заболеваниях и представляют собой провокационные пробы, при которых на участок неповрежденной дерматитом кожи передней поверхности предплечья, спины или живота наносят известное количество испытуемого вещества для воспроизведения процесса в миниатюре. Аппликационные К. п. легче контролировать, чем реакции при более глубоком повреждении кожи (скарификационные и внутрикожные). Существуют закрытые и открытые аппликационные пробы. Открытые применяют для масляно-смолистых или текучих веществ. Вещество наносят или непосредственно на кожу (красители, косметические вещества), или в виде «кожного окна», через к-рое наблюдают реакцию: кожу обрабатывают 70% спиртом и высушивают; после этого квадратный кусочек целлофана или стекла с трех сторон прикрепляют лейкопластырем и в образовавшийся карман вводят испытуемую жидкость. Закрытые аппликационные пробы производят следующим образом. На поверхность кожи накладывают квадратный кусок марли размером 1 см 2 , смоченный испытуемым р-ром. Сверху прикрывают куском целлофана или вощаной бумаги несколько большего размера и заклеивают так, чтобы марля не выходила за край наклейки (во избежание ее быстрого высыхания). Одновременно с испытуемыми р-рами в качестве контроля ставится проба с тест-контрольной жидкостью или физиологическим раствором. Р-р испытуемого вещества подбирают таким образом, чтобы он не вызывал раздражения кожи у здорового человека. При появлении зуда или чувства жжения в месте проведения пробы больной должен снять наклейку и марлю и удалить остатки испытуемого вещества с поверхности кожи спиртом или эфиром. Испытуемый материал держат на коже не более 5 дней. Результат аппликационных К. п. оценивают через 20 мин., 12 час., 1, 3 и 7 сут. после снятия вещества (цветн. рис. 1—3). Специфичность аппликационных К. п. весьма высока, если соблюдаются все технические правила их постановки, т. е. правильно подбирается концентрация аллергена, учитываются показатели контрольной пробы и т. д. Специфичность их аналогична специфичности скарификационных К. п. и гораздо выше, чем при внутрикожных. Безопасность значительно выше, чем при внутрикожных пробах, т. к. поверхностные слои клеток кожи препятствуют быстрому проникновению аллергена в организм. При быстрой реакции аллерген удаляют. При позднем типе реакции аллерген тоже удаляют, как только появятся симптомы раздражения кожи. Прием антигистаминных препаратов не влияет на результаты проб; кортикостероидные препараты, наоборот, значительно снижают интенсивность реакции.
Скарификационные пробы введены в практику Шлоссом (E. Schloss) в 1912 г. Они менее чувствительны, чем внутрикожные пробы, но более специфичны и безопасны. Скарификационные пробы проводят на коже передней поверхности предплечья. Используют пыльцевые аллергены, содержащие 1000 и 10 000 PNU (единиц белкового азота), и бытовые и эпидермальные аллергены, содержащие 5000—10 000 PNU. Если экстракт аллергена содержит 20 000 PNU, его разводят тест-контрольной жидкостью. На предварительно обработанную 70% спиртом и высушенную кожу наносят капли стерильных аллергенов на расстоянии 3—4 см друг от друга. Аллергены набирают из флаконов через резиновые пробки иглой шприца (для каждого аллергена используется отдельный шприц). Затем через каждую каплю аллергена отдельной иглой или скарификатором делают две параллельные царапины длиной по 0,5 см каждая так, чтобы не повредить сосуды. При использовании порошкообразных аллергенов сначала на кожу наносят капли тест-контрольной жидкости, затем сухой стерильной иглой (отдельная игла для каждого аллергена) берут небольшие количества аллергена (на кончике иглы), вносят в каплю тест-контрольной жидкости и той же иглой делают скарификацию. В качестве отрицательного контроля обязательно применяют тестирование с тест-контрольной жидкостью, а в качестве положительного — с р-ром гистамина в разведении 1: 10 000. Одновременно делают не более 20 тестов. Оценка результатов скарификационных тестов производится через 20 мин. (цветн. рис. 4—5).
Проба уколом является модификацией скарификационных Кожных проб, при этой пробе возможность повреждения кровеносных сосудов меньше, чем при скарификации. Выполняют ее с теми же аллергенами. Для пробы уколом берется более концентрированный р-р аллергена, чем при выполнении скарификационной К. п., т. к. в кожу попадает минимальное количество аллергена. Техника пробы уколом имеет различные модификации. Классическую пробу проводят следующим образом. На предварительно дезинфицированную кожу наносят каплю испытуемого аллергена и через каплю прокалывают иглой эпидермис кожи. Оценка пробы уколом проводится так же, как при скарификационной пробе. Только после получения отрицательных результатов этой пробы или скарификационной пробы с небактериальными аллергенами переходят к внутрикожным пробам.
Внутрикожные пробы применяются преимущественно для выявления сенсибилизации к аллергенам бактериального или грибкового происхождения. Для диагностики аллергических заболеваний впервые предложены Р. Куком в 1911 г. Внутрикожные пробы оказывают существенную помощь при диагностике туберкулеза (реакция Манту), бруцеллеза (реакция Бюрне), эхинококкоза (реакция Касони) и др. Внутрикожная реакция Манту дополняет пробу Пирке.
При внутрикожном введении аллергена обеспечивается более тесный контакт его с клетками кожи, чем при скарификации. Поэтому внутрикожные пробы примерно в 100 раз более чувствительны, но менее специфичны, чем скарификационные. Они могут давать местные и общие аллергические осложнения. Для внутрикожных тестов используются шприцы с делениями по 0,01 мл и тонкие иглы с коротким срезом и незатупленным острием. Для каждого аллергена необходим отдельный шприц и отдельная игла. Предварительно кожу передней поверхности предплечья обрабатывают 70% спиртом. Инъекция производится следующим образом: кончик иглы, надетой на шприц с небольшим количеством исследуемого аллергена, под очень малым углом вводят в поверхностный слой эпидермиса срезом иглы вверх так, чтобы отверстие иглы полностью скрылось в эпидермисе (рис.), после чего внутрикожно вводят необходимое количество аллергена. Чем поверхностнее сделана инъекция, тем выше чувствительность К. п. Реакция на тот же аллерген при его подкожном введении будет совсем слабой, а при внутримышечном введении — отрицательной. При правильной технике введения на поверхности кожи сразу же после введения образуется инфильтрат. При тестировании неинфекционных аллергенов их вводят внутрикожно в количестве 0,01—0,02 мл экстракта. Бактериальные аллергены вводят в больших количествах — от 0,05 до 0,1 мл. Обязательно параллельное тестирование с тест-контрольной жидкостью. Одновременно можно делать не более 10 внутрикожные тестов с аллергенами из разных групп. При отрицательных и слабых реакциях ставят дополнительно еще 10 тестов. Результат пробы смотрят через 15—20 мин. и через 24 и 48 час. (цветн. рис. 6—12).
Холодовая и тепловая пробы. Для диагностики так наз. физической аллергии применяют холодовую и тепловую пробы. При холодовой пробе на коже ладонной поверхности предплечья фиксируется кусок льда 2—3 см в диам. на 3 мин. или пробирка, наполненная водой с кусочками льда, на 10 мин. При положительной реакции (при холодовой крапивнице контактного типа) на коже образуется уртикарный волдырь, обычно без «псевдоподий», по форме совпадающий с очертаниями кусочка льда или пробирки. Тепловая проба проводится следующим образом. Пробирку с водой, нагретой до t° 40—42°, укрепляют на коже передней поверхности предплечья на 10 мин. Положительная проба характеризуется образованием уртикарного волдыря на месте контакта. К. п. при физической аллергии не выявляют специфического аллергена, а позволяют лишь установить наличие у больного повышенной чувствительности к температурному фактору.
Оценка кожных проб
При оценке Кожных проб (табл.) необходимо учитывать, что их специфичность не является абсолютной. В отдельных случаях они могут быть положительными, но не иметь отношения к этиологии заболевания. Такие реакции называются ложноположительными. Причинами ложноположительных реакций могут быть: 1. Повышенная чувствительность капилляров кожи к механическому раздражению. В этом случае все пробы, включая и пробу с тест-контрольной жидкостью, дают волдырный отек и не могут учитываться как положительные. Иногда такую реакцию удается снять назначением антигистаминных препаратов. 2. Использование тупых или слишком толстых игл, или нанесение слишком глубокой скарификации. 3. Неспецифическое раздражающее действие аллергена вследствие его неправильного приготовления (аллерген должен быть изотоничным и иметь нейтральную реакцию). 4. Введение избыточного количества аллергена (при внутрикожном тестировании). 5. Загрязнение инструментов (шприцев, игл) аллергенами, оставшимися от предыдущего тестирования, или р-ром гистамина. 6. Повышенная чувствительность к консервантам, на которых готовятся аллергены (мертиолат, фенол, глицерин). 7. Близкое иммунологическое сходство между нек-рыми аллергенами в связи с наличием общих антигенных группировок.
Если в анамнезе имеются четкие указания на этиологическое значение определенного аллергена, а К. п. дают с ним отрицательные результаты, то такие ответы называются ложноотрицательными. Причинами ложноотрицательных реакций могут быть следующие: 1) потеря экстрактами аллергенных свойств вследствие длительного и неправильного хранения или в процессе изготовления (особенно быстро инактивируются пищевые аллергены); 2) отсутствие или снижение чувствительности больного, вызванное: а) истощением запаса антител в период или после тяжелого обострения болезни, б) отсутствием кожно-сенсибилизирующих антител при некоторых видах аллергии, напр, при пищевой аллергии (см.), в) снижением реактивности кожи, связанным с нарушением кровообращения, отеком, дегидратацией, влиянием ультрафиолетовой радиации, с общей кахексией и преклонным возрастом, г) приемом больным незадолго перед тестированием антигистаминных препаратов, адреналина и эфедрина.
Источник