Метод тильманса определения витамина с

Лабораторная работа № 4 Количественное определение витамина с (аскорбиновой кислоты) в пищевых продуктах и в моче по методу Тильманса

В настоящее время существуют методы определения витамина С и его производных в крови, тканях, слюне, пищевых продуктах и фармакопейных препаратах.

Может быть использовано спектрофотометрическое определение, использование капиллярного электрофореза, поточно-флюоресцентного метода и определение с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Одним из наиболее широко распространенных методов количественного определения витамина С является оксидометрический метод, основанный на способности аскорбиновой кислоты (АК) восстанавливать 2,6-дихлорфенол, который при этом переходит в бесцветную лейкоформу. Этот метод определяет только восстановленную форму АК. С его помощью можно получить сведения о содержании витамина С в пищевых продуктах, а также в к сыворотке крови и других биологических тканях, и на основе полученных данных судить об обеспеченности им организма .

В гигиенических исследованиях использование данного метода позволяет контролировать сохранность витамина С в пищевых продуктах в зависимости от способов и сроков хранения, характера технологической и, в частности, кулинарной обработки пищи, позволяет выявить изменения в обмене витамина С при воздействии химических веществ на организм в производственных условиях .

Исследуемый материал: 1. Хвоя; 2. Картофель сырой и варёный; 3. Капуста квашеная и свежая; 4. Моча.

Реактивы и оборудование: 1. Натриевая соль 2,6-дихлорфенолиндофенол 0,001 Н раствор; 2. Хлороводород 10% раствор; 3. Весы и разновесы; 4. Мер-ные цилиндры на 50 и 10 мл; 5. Пипетки на 1 мл; 6. Фарфоровые ступки с

пестиками; 7. Микробюретки; 8. Стеклянные палочки; 9. Колбочка или широкие пробирки; 10. Бюретки; 11. Скальпель; 12. Воронки; 13. Вата.

Принцип метода: определение витамина С основано на его сильной редуцирующей способности.

При определении используют окислительно-восстановительную реак-цию между аскорбиновой кислотой и 2,6-дихлорфенолиндофенолом (2,6-ДХФИФ) — краской Тильманса в кислой среде. Раствор 2,6-ДХФИФ в нейт-ральной среде окрашен в синий цвет. Пока в растворе есть аскорбиновая кис-лота, названный реактив восстанавливается ею и при этом обесцвечивается. После окисления им всей аскорбиновой кислоты избыток реактива окраши-вает раствор в кислой среде в слабо розовый цвет. При появлении окраски титрование прекращают и замечают количество раствора 2,6-ДХФИФ, затра-ченного на титрование.

Витамин С (восстанов- 2,6 -ДХФИФ

ленная форма) (окисленная форма)

Витамин С (окисленная форма) 2,6-ДХФИФ (восстановленная форма)

Определение содержания витамина «с» в хвое и свежей капусте.

Хвоя и капуста содержат большое количество витамина С, поэтому для его определения нужно брать лишь небольшую часть исследуемого материала.

Приготовление вытяжки: Хвою или свежую капусту отвешивают на весах в количестве 1,0 г и тщательно измельчают в фарфоровой ступке с 2 мл 10% раствора хлорводорода. Растертую массу осторожно, без потерь (палочкой) переносят в мерный цилиндр (на 40 мл для хвои и на 10 мл для капусты, ступку и пестик обмывают 10% раствором соляной кислоты и промывную жидкость присоединяют к общей порции вытяжки. Объем жидкости в цилиндре доводят дистиллированной водой до метки 40 мл для хвои и до метки 10 мл для свежей капусты. Содержимое цилиндра перемешивают и оставляют стоять 10 мин. Не встряхивая, вытяжки филь-труют через ватный фильтр и 1 мл фильтрата употребляют для титрования.

Титрование: в колбочку отмеривают пипеткой 1 мл фильтрата и прибавляют к нему 19 мл воды. Содержимое титруют из микробюретки

0,001 Н раствором 2,б-ДХФИФ до появления слабо розового окрашивания, не исчезающего в течение 30 с. Вычисляют содержание витамина С в 100 г хвои или свежей капусты.

Расчет: молекулярная масса аскорбиновой кислоты равна 176. Находят грамм-эквивалент аскорбиновой кислоты. В реакции с 2,6-ДХФИФ она двухосновная, следовательно, грамм-эквивалент равен М/2=176/2=88 г, а 1 мл 0,001 Н раствора 2,6-ДХФИФ соответственно равен 0,088 г аскорбиновой кислоты. Количество миллилитров 2,6-ДХФИФ, затраченного на титрование исследуемого раствора, эквивалентно содержанию витамина С в титруемой жидкости. Расчет содержания витамина С (Х) в 100 г хвои или капусты проводится по следующей формуле:

где а — объем раствора 2,6-ДХФИФ, пошедшего на титрование; d – взятая навеска хвои или свежей капусты; с — общий объем вытяжки; b — объем водной вытяжки, взятой для титрования (1 мл).

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 5 ИЗУЧЕНИЕ МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ В МОЛОКЕ ВИТАМИНА С (АСКОРБИНОВОЙ КИСЛОТЫ) И ФЕРМЕНТОВ

Цель работы: определить содержание витамина С и ферментов в различных образцах молока.

Задание 1. Провести качественную реакцию на витамин С.

2. Количественное определение витамина с 2,6-дихлорфенолиндофенолом (по Тильмансу)

Краткие теоретические сведения

Витамины. В молоке содержатся все жизненно необходимые витамины, но некоторые в недостаточных количествах. Содержание витаминов зависит от сезона года, породы животных, качества кормов, условий хранения и обработки молока. Жирорастворимые витамины A, D, Е, К и (В-каротин устойчивы к нагреванию и начинают разрушаться при температуре свыше 120°С (витамин А), но не устойчивы к действию воздуха, ультрафиолетовых лучей и кислот. Витамин А придает сливочному маслу желтый цвет. Витамин Е является антиокислителем жиров и защищает витамин А от окислительного разрушения. Водорастворимые витамины, за исключением вита.

Важным фактором, влияющим на активность ферментов, является рН среды. Ферменты различаются по оптимальным для их действия значениям рН. При слишком кислой или щелочной реакции среды происходит денатурация фермента, и он теряет свою активность.

По химической природе ферменты представляют собой белковые вещества. Они могут быть простыми и сложными белками. Ферменты называют по тому веществу, на которое они действуют, прибавляя к корню названия окончание «аза»: липаза, лактаза, пептидаза и пр.

В молоке ферменты находятся в свободном состоянии, а также связаны с казеиновыми мицеллами и оболочками жировых шариков.

Конические колбы емкостью 250,100,50 мл; весы; пипетки на 5, 10,25 мл; бюретка; микробюретка; воронка, складчатый фильтр, раствор с массовой долей метафосфорной или соляной кислоты 2 %; насыщенный раствор щавелевой кислоты; насыщенный раствор хлорида натрия, 2,6-дихлорфенолиндофенол; метиленовый голубой, редуктазник, термостат водяной циркуляционный, 0,1%-ного р-ра фенолфталеинфосфата натрия в аммиачной буферной смеси.

Порядок выполнения работы

Сущность метода: химический метод определения витамина С специфичным индикатором 2,6-дихлорфенолиндофенолом (краска Тильманса) основан на свойствах этого индикатора изменять свою окраску в зависимости от реакции среды. В кислой среде индикатор приобретает розовую окраску, в щелочной и нейтральной синюю. Восстанавливаясь, индикатор обесцвечивается. Обесцвечивание индикатора в присутствии витамина С объясняется легкой окисляемостью витамина.

Проведение опыта: 5 мл молока развести в 3 раза водой. При разведении молоко отмерить пипеткой, дистиллированную воду налить из бюретки. В коническую колбу емкостью 50 мл внести 1 мл 2 %-й соляной кислоты 5 мл полученного раствора молока, довести водой до общего объема 15 мл. Осторожно взбалтывая, содержимое колбы титруют из микробюретки 0,001 н. раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола, приливая его каплями до появления слабо-розового окрашивания, сохраняющегося 0,51 мин. Сделать два параллельных определения из одной порции разведенного молока и найти среднюю величину.

Содержание витамина С определить по формуле:

где количество рабочего раствора 2,6 дихлорфенолиндофенола, по-шедшее на титрование, мл; k поправка на титр раствора 2,6 дихлор-фенолиндофенола; V объем, до которого доведена навеска молока при прибавлении к ней воды и соляной кислоты, мл; V₁ объем анализируемой жидкости, взятой для титрования, мл; q навеска молока, г; 0,88 количество витамина С, соответствующее 1 мл 0,001 н раствора 2,6 дихлорфенолиндофенола, мг.

Упрощенный метод определения витамина С

В колбочку наливают 50 мл молока и добавляют 4 мл насыщенного раствора щавелевой кислоты, взбалтывают, приливают 10 мл насыщенного раствора хлорида натрия, взбалтывают и оставляют при комнатной температуре на 5 мин. Затем содержимое колбочки фильтруют через бумажный складчатый фильтр, отмеривают пипеткой 20 мл фильтрата и титруют его из бюретки вместимостью 5 мл раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола до появления слабо-розового цвета, сохраняющегося 30 секунд.

Для определения массовой доли L-аскорбиновой кислоты в молоке используют формулу:

где К — массовая доля L-аскорбиновой кислоты, мг/кг;

V -объем раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола, израсходованного на титрование, мл;

Т — поправочный коэффициент к титру индикатора;

0,088 — масса L-аскорбиновой кислоты, соответствующая 1 мл2,6-дихлорфенолиндофенола, мг;

m — масса молока, соответствующая взятому фильтрату, г (m=19,5 г)

1000- коэффициент пересчета на килограмм молока.

После подстановки известных значений в формулу получают окончательную расчетную формулу:

Проба на редуктазу. Редуктаза — фермент, вырабатываемый микроорганизмами. Чем больше в молоке микробов, тем больше и ферментов. Этот фермент способен обесцвечивать краски — метиленовую синь или резазурин. Чем быстрее произойдет обесцвечивания, тем больше в молоке микроорганизмов. На этой закономерности и основан метод определения класса молока по бактериальной загрязненности, следует соблюдать санитарно-гигиенические правила. Редуктазная проба может выполняться с метиленовой синью и с резазурином.

С метиленовой синью. Проба может выполняться двумя методами: стандартным и ускоренным. Метод основан на свойстве фермента редуктазы, выделяемого микроорганизмами. Восстанавливать метиленовую синь в ее бесцветную лейкоформу. Чем больше микроорганизмов в молоке, тем быстрее идет обесцвечивание метиленовой сини. Оптимальная температура восстановления метиленовой сини ферментом редуктазой составляет от 38 до 40 ?С.

1. В пробирку налить 1 мл раствора метиленовой сини и 20 мл молока, закрыть пробкой и хорошо перемешать.
2. Пробирку с молоком поместить в термостат (или в редуктазник) с температурой воды 38-40 ?С. Уровень воды в термостате должен быть выше уровня молока в пробирке, необходимо поддерживать постоянную температуру воды.
3. Проверять время обесцвечивания проб через 20 минут, через 2 часа и через 5,5 часа. Окончанием испытания на редуктазу считать момент, когда молоко в пробирках обесцвечивается. Наличие небольшого окрашенного кольцеобразного слоя на верху или окраска небольшой части внизу в расчет не принимаются.
4. Если молоко исследуется по ускоренному методу, то стандартный раствор метиленовой сини нужно разбавить в 10 раз и для анализа взять 10 мл молоко.

На основании изменения окраски молока и продолжительности наблюдения имеется таблица 5.1, пользуясь которой можно установить класс бактериальной загрязненности молока.

Таблица 5.1 — Определение класса бактериальной загрязненности молока (с метиленовой синью)

Экспериментальное определение количественного содержания витамина С в пищевых продуктах и витаминных препаратах

В этой главе подробно остановимся на методах количественного определения витамина С, обобщим результаты проведенных исследований [4], [6], [10], [11], [16].

Общая характеристика применяемых количественных методов анализа

Метод Тильманса

Количественное содержание витаминов в растениях, как правило, очень невелико, что обусловливает специфику и необходимость особо точных методов определения многих витаминов. Наиболее простым по методике и технике исследования и доступным для лабораторных условий является метод определения витамина С по Тильмансу [4].

Метод основан на способности аскорбиновой кислоты в кислой среде восстанавливать 2,6-дихлорфенолиндофенол до лейкоформы и окисляться в дегидроформу по уравнению:

Расчет содержания аскорбиновой кислоты в мг/% производят по формуле:

где А — объем краски, пошедшей на титрование вытяжки, мл; В — объем краски, пошедшей на контрольное титрование, мл; Т_кр/аск — титр краски по аскорбиновой кислоте, мг/мл (0,05 г аскорбиновой кислоты соответствует 1 мл краски Тильманса); V_к — общий объем экстракта, мл; V_п — объем экстракта, взятого для титрования, мл; m — масса исследуемого материала в г.

Метод йодометрии

Аскорбиновая кислота легко окисляется благодаря наличию ендиольной группировки, поэтому для ее определения можно использовать различные методы редоксиметрии, в том числе и такой относительно слабый окислитель, как йод. Метод йодометрии в данном случае также является наиболее простым и доступным при организации исследовательской работы со школьниками.

Количественное определение аскорбиновой кислоты основано на окисленни ее раствором йода:

Стандартный потенциал окисления аскорбиновой кислоты Е = -0,71В

Стандартный потенциал восстановления йода Е = 0,53В

Разность потенциалов аскорбиновой кислоты и йода будет достаточно большой ЭДС = 0,53 — (-0,71) = 1,24В, поэтому йод может быть использован для ее количественного определения.

Йодометрическое определение аскорбиновой кислоты представляет собой характерный пример способа прямого титрования анализируемого вещества стандартным раствором йода в иодиде калия.

Титрование проводят методом отдельных навесок, сущность которого заключается в следующем. Несколько (3-5) приблизительно равных навесок анализируемого вещества, взятых на аналитических весах, растворяют в произвольном минимальном (приблизительно 10 мл) объеме растворителя и полностью титруют.

Несколько навесок анализируемого материала помещают в пронумерованные конические колбы для титрования, в которые предварительно налито около 10 мл дистиллированной воды. Затем добавляют 1-2мл 6н раствора серной кислоты и титруют при комнатной температуре 0,1н раствором йода в иодиде калия в присутствии индикатора крахмала до появления синей окраски раствора.

Расчет содержания аскорбиновой кислоты в мг/% производят по формуле:

где С_э — нормальная концентрация рабочего раствора, моль/л; V — объем рабочего раствора, пошедшего на титрование, мл; М_Э — эквивалентная масса аскорбиновой кислоты, г/моль; m — масса навески исследуемого материала, г.

Количественное определение содержания витамина С – в твердых продуктах

Навеску исследуемого продукта (1 г капусты, яблока, груши и т. п., или 5 г картофеля) растирают в ступке с 2 мл 10% раствора соляной кислоты, приливают 8 мл воды, перемешивают, оставляют на 5-10 минут для полного извлечения витамина. Затем содержимое фильтруют (кроме картофеля). Для титрования берут 2 мл фильтрата (картофельную кашицу титруют целиком), добавляют 10 капель 10% раствора НCI и титруют краской Тильманса до розового цвета, сохраняющегося в течение 30 сек. Результат титрования записывают и по формуле рассчитывают содержание витамина С в 100 г продукта. Концентрацию витамина С выражают в мг/дл.

Расчет производят по формуле:

1 мл 0,001н. раствора краски Тильманса эквивалентен 0,088 мг витамина С

А-количество краски Тильманса, израсходованной на титрование;

Б- объем экстракта, взятый для титрования, мл;

В – количество продукта, взятое для анализа, г;

Г- общее количество экстракта, мл;

100 – пересчет содержания витамина С на 100 г продукта.

Определение витамина С в моче

Определение витамина С в моче позволяет судить об обеспеченности организма этим витамином. Однако, при гиповитаминозе С содержание его в моче не всегда понижено и может быть нормальным. У здоровых людей введение 100 мг витамина С приводит к повышению его концентрации в крови и экскреции с мочой. При гиповитаминозе С ткани, испытывающие недостаток в витамине, задерживают принятый витамин С, и его экскреция не увеличивается. Моча здорового человека содержит 20-30 мг в суточном объеме.

В стаканчик отмеривают 10 мл мочи и 10 мл воды, перемешивают, подкисляют 20 каплями 10% раствора НCI и титруют 0,001н раствором краски Тильманса до появления розовой окраски. Результат титрования записывают и по формуле производят расчет, выражая экскрецию витамина С в мг/сутки.

А- мл краски Тильманса, пошедшей на титрование;

Б- объем мочи, взятый для титрования, мл;

В – среднее суточное количество мочи, (1500 мл у мужчин, 1200 мл – у женщин).

Для диагностики гиповитаминоза С, проводят определение витамина С в моче. Наблюдается соответствие между концентрацией витамина С в крови и количеством этого витамина, выделяемого с мочой. Однако, при гиповитаминозе содержание аскорбиновой кислоты не всегда понижено. Часто оно бывает нормальным, несмотря на большой недостаток этого витамина в тканях и органах. У здоровых людей введение per os 100 мг витамина С быстро приводит к повышению его концентрации в крови и моче. При гиповитаминозе С ткани, испытывающие недостаток, задерживают витамин и его концентрация в моче не повышается. Моча здорового человека содержит 20 – 30 мг витамина С.

У детей уровень этого витамина понижается при цинге и других заболеваниях.

Суточная потребность детей

от 5-6 мес. До 1 года составляет 20 мг,

от 1 года до 2 лет – 35 –50 мг,

14 – 17 лет – 80 мг для юношей и 70 мг для девушек.

Потребность для беременных женщин – 100 мг/сут, в периоды кормления грудью – 120 мг/сут.

У маленьких детей с-авитаминоз проявляется болезненностью конечностей при движении, беспокойством или апатией, субфебрильной температурой, снижением количества гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов крови. Характерны кровоизлияния и болезненные припухания в области кистей рук, костно-хрящевой части ребер, реже кровоизлияния в глазницы и веки, в кости лица и черепа. На коже мелкоточечные кровоизлияния в виде сыпи. Десны при отсутствии зубов не поражаются.

На наличие гиповитаминоза указывает снижение содержания витамина в плазме крови ниже 28 – 29 мкмоль/л, в суточной моче ниже 20 мг, в моче, выделенной натощак в течение часа – ниже 0,5 мг. Считается, что в течение двух недель весь поступивший с пищей витамин С в организме расщепляется.

Решить следующие ситуационные задачи:

1. Врач предполагает наличие гиповитаминоза С у больного. Как можно провести биохимическую диагностику гиповитаминоза С ? (ответ: по экскреции витамина С в моче)

2. Больному ревматизмом показано лечение кортикостероидными гормонами. Но врач, опасаясь развития гипофункции коры надпочечников, лечение кортикостероидами не назначил, а рекомендовал больному принимать большие терапевтические дозы аскорбиновой кислоты. Правильно ли поступил врач? Ответ: так как витамин С принимает участие в гидроксилировании пролина и лизина при созревании коллагена (основной белок соединительной ткани при поражении ревматоидным артритом), то действия врача оправданы.

3. Что лежит в основе действия аcкорбиновой кислоты, рекомендованной для лечения повышенной проницаемости капилляров у больного суставным ревматизмом? (см ответ на предыдущую задачу)

1. Какие пищевые продукты наиболее богаты витамином С?

2. Какова экскреция витамина С с мочой?

3. Какие химические свойства аскорбиновой кислоты обусловливают ее активное участие в метаболических процессах?

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА СТУДЕНТОВ: по теме «Витамины» заполняется таблица.

Название

Водо– или жиро-растворимые

Источники

Участие в биохимических реакциях: — кофермент; — фермент; катализируемая реакция

Симптомы недостаточности или гипервитаминоза

Анти ви тамины

В₁, В₂, В₆, РР, С, пантотеновая кислота, фолиевая кислота, В₁₂, биотин, А, Д, Е, К.

Витаминоподобные соединения: биофлавоноиды (витамин Р), инозит, карнитин, липоевая кислота, оротовая кислота, пангамовая кислота, парааминобензойная кислота, S-метилметионинсульфоний (витамин U), холин.

Практические навыки, которыми должен овладеть студентуметь оценивать обеспечение организма витамином С и его значение в метаболических процессах

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лучшие изречения: Как то на паре, один преподаватель сказал, когда лекция заканчивалась — это был конец пары: «Что-то тут концом пахнет». 8570 — | 8144 — или читать все.

85.95.179.73 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.

Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)
очень нужно

Количественное определение содержания витамина С – в твердых продуктах

Расчет производят по формуле:

1 мл 0,001н. раствора краски Тильманса эквивалентен 0,088 мг витамина С

А-количество краски Тильманса, израсходованной на титрование;

Б- объем экстракта, взятый для титрования, мл;

В – количество продукта, взятое для анализа, г;

Г- общее количество экстракта, мл;

100 – пересчет содержания витамина С на 100 г продукта.

Определение витамина С в моче

А- мл краски Тильманса, пошедшей на титрование;

Б- объем мочи, взятый для титрования, мл;

В – среднее суточное количество мочи, (1500 мл у мужчин, 1200 мл – у женщин).

У детей уровень этого витамина понижается при цинге и других заболеваниях.

Суточная потребность детей

от 5-6 мес. До 1 года составляет 20 мг,

от 1 года до 2 лет – 35 –50 мг,

14 – 17 лет – 80 мг для юношей и 70 мг для девушек.

Потребность для беременных женщин – 100 мг/сут, в периоды кормления грудью – 120 мг/сут.

Решить следующие ситуационные задачи:

1. Какие пищевые продукты наиболее богаты витамином С?

2. Какова экскреция витамина С с мочой?

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА СТУДЕНТОВ: по теме «Витамины» заполняется таблица.

Название

Водо– или жиро-растворимые

Источники

Участие в биохимических реакциях: — кофермент; — фермент; катализируемая реакция

Симптомы недостаточности или гипервитаминоза

Анти ви тамины

В₁, В₂, В₆, РР, С, пантотеновая кислота, фолиевая кислота, В₁₂, биотин, А, Д, Е, К.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лучшие изречения: На стипендию можно купить что-нибудь, но не больше. 9180 — | 7320 — или читать все.

Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)
очень нужно

Работа 20. Количественное определение витамина С в хвое, шиповнике, картофеле, луке, молоке, капусте по методу Тильманса

Принцип метода. Количественное определение аскорбиновой кислоты основано на её способности окисляться 2,6-дихлорфенолиндофенолом в дегидроаскорбиновую кислоту. Определение проводится путём титрования исследуемой жидкости 0,001 н. раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола, в условиях, предохраняющих аскорбиновую кислоту от разрушения (кислая среда). Одному мл 0,001 н. раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола соответствует 1 мл 0,001 н. аскорбиновой кислоты, т.е. 0,0005 ммоль аскорбиновой кислоты (или 0,088 мг аскорбиновой кислоты). Для расчета содержания аскорбиновой кислоты используют формулы:

или

где 0,088 (0,0005) – количество мг (ммоль) аскорбиновой кислоты, соответствующее 1 мл 0,001 н. раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола ; а — количество раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола, пошедшее на титрование; б — общее количество вытяжки, мл; в — масса вещества в граммах, взятого для анализа; г- количество мл вытяжки, взятое для титрования; 1000 — коэффициент пересчета на кг продукта.

Реактивы, исследуемый материал

1. Раствор натриевой соли 2,6-дихлорфенолиндофенола, 0,001 н. 2. Раствор соляной кислоты, 20 г/л. 3. Сухой шиповник и хвоя. 4. Картофель. 5. Лук. 6. Молоко. 7. Капуста.

Определение содержания витамина С в шиповнике или хвое. 0.5 г сухой хвои или шиповника тщательно растереть в фарфоровой ступке с 2 мл раствора соляной кислоты, перемешать и осторожно, без потерь (на палочке) через воронку перенести содержимое ступки в мерную колбу емкостью 50 мл. Ступку и пестик обмыть раствором соляной кислоты и промывную жидкость присоединить к общей порции вытяжки. Объем жидкости в мерной колбе довести дистиллированной водой до метки, колбу закрыть пробкой и содержимое её несколько раз перемешать. Небольшую порцию вытяжки отфильтровать через бумажный фильтр и фильтрат использовать для титрования. В 2 колбочки емкостью 50 мл отмерить по 2 мл вытяжки из шиповника или по 10 мл вытяжки из хвои (к вытяжке из шиповника добавить 8 мл раствора соляной кислоты). Содержимое колбочек титровать раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола до появления розового окрашивания, не исчезающего в течение 30 секунд. Рассчитать содержание аскорбиновой кислоты.

Определение содержания витамина С в картофеле.

5 г картофеля измельчить и растереть в фарфоровой ступке, приливая постепенно 1 мл соляной кислоты и 15 мл дистиллированной воды. Полученную массу слить в коническую колбочку. Ступку ополоснуть водой и слить по стеклянной палочке в колбу. Титровать раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола. Рассчитать содержание аскорбиновой кислоты.

Определение содержания витамина С в капусте. 1 г капусты взвесить, растереть в ступке с 2 мл соляной кислоты, прилить 8 мл воды и отфильтровать. Для титрования отмерить 2 мл фильтрата, добавить 10 капель соляной кислоты и титровать раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола до розовой окраски. Рассчитать содержание аскорбиновой кислоты.

Определения содержания витамина С в молоке. К 10 мл молока добавить 10 капель соляной кислоты и 10 мл воды. Титровать раствором 2,6 дихлорфенолиндофенола до розовой окраски. Рассчитать содержание аскорбиновой кислоты.

Определение витамина С в луке. 0,5 г лука взвесить и растереть в ступке с 2 мл соляной кислоты и 20 мл воды. Отфильтровать и титровать раствором 2,6 дихлорфенолиндофенола до розовой окраски. Рассчитать содержание аскорбиновой кислоты.

Лабораторная работа №4 Витамины. количественное определение витамина С 2,6-дихлорфенолиндофенолом (по тильмансу)

ВИТАМИНЫ. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВИТАМИНА С

2,6-ДИХЛОРФЕНОЛИНДОФЕНОЛОМ (ПО ТИЛЬМАНСУ)

Недостаточность аскорбиновой кислоты в пище вызывает у человека заболевание, известное под названием скорбута, или цинги. Клинические симптомы недостаточности сначала проявляются быстрой утомляемостью, анемией, головокружением, затем появляется кровоточивость десен, склонность к кровоизлияниям в подкожную клетчатку, признаки нарушения сердечной деятельности, а также резкое снижение сопротивляемости организма инфекциям,

Аскорбиновая кислота является лактоном ненасыщенной гексоновой кислоты. Наличие в ее молекуле двойной С2—С3 связи делает подвижными протоны гидроксильных групп у тех же атомов, что обусловливает кислый характер соединения с резко выраженной редуцирующей способностью. При окислении аскорбиновая кислота переходит в дегидроаскорбиновую кислоту:

В чистом виде аскорбиновая кислота представляет собой бесцветные кристаллы без запаха, кислого вкуса, хорошо растворимые в воде и спирте и нерастворимые в большинстве органических растворителей. В кристаллическом виде аскорбиновая кислота устойчива, но в присутствии окислителей легко разрушается в водных и особенно щелочных растворах, образуя щавелевую и треоновую кислоты.

Работа 1. Количественное определение витамина С

2,6-дихлорфенолиндофенолом (по Тильмансу)

Метод количественного определения аскорбиновой кислоты основан на ее способности восстанавливать 2,6-дихлорфенолиндофенол, которым титруют исследуемый раствор в кислой среде, предохраняющей аскорбиновую кислоту от разрушения.

Оборудование и реактивы: весы, фарфоровая ступка, пестик, мерные колбы на 50 мл, воронка, фильтр, стеклянная палочка, конические колы, бюретка, 2% раствор соляной кислоты, дистиллированная вода, 0,001 н. раствор 2,6-дихлорфенолиндофенола

Материалы: различный растительный материал (хвоя, шиповник, капуста, клубни картофеля, яблоки и др.)

1. Приготовление фильтрата. Точную навеску растительного материала (сухих ягод шиповника – 1 г, хвои – 1 г, капусты – 5 г, картофеля – 5 г и т. д.) тщательно растирают в фарфоровой ступке с 4 мл 2% раствора соляной кислоты, добавив немного измельченного стекла. Затем без потерь переносят содержимое ступки в мерную колбу емкостью 50 мл, несколько раз смывая ступку водой и сливая ее по стеклянной палочке в ту же колбу, и доводят объем раствора дистиллированной водой до метки. Полученную смесь оставляют на 5-10 мин. Содержимое колбы тщательно перемешивают, фильтруют через бумажный фильтр и фильтрат используют для определения витамина С. Экстракт, полученный из картофеля, не фильтруют.

2. Титрование. Для титрования в конические колбочки отмеривают определенный объем фильтрата: шиповника — 1 мл, хвои – 5 мл, капусты – 5 мл. картофеля – всю полученную смесь без фильтрации. В каждую колбочку добавляют по 4 мл 2% раствора соляной кислоты и титруют из бюретки 0,001 н. 2,6-дихлорфенолиндофенолом до появления розового окрашивания, не исчезающего около 30 с.

Одновременно проводят контрольное титрование смеси реактивов. Число миллилитров раствора краски, пошедших на контрольное титрование, вычитают из числа миллилитров, пошедших на титрование вытяжки.

3. Обработка результатов. Результаты работы занесите в таблицу:

Количество вытяжки, взятое для титрования, мл

Источник