Расширенный комплексный анализ крови на витамины (A, бета-каротин, D, E, K, C, B1, B2, B3, B5, B6, B9, B12)
Витамины – жизненно важные микронутриенты, необходимые для нормального функционирования клеток, тканевого дыхания, метаболизма белков, жиров и углеводов, работы различных ферментных систем организма, окислительно-восстановительных процессов. Дефицит витаминов отрицательно влияет на здоровье человека и функции практически всех органов.
Жиро- и водорастворимые витамины.
Синонимы английские
Vitamins complex; water and fat soluble vitamins.
Высокоэффективная жидкостная хроматография с тандемной масс-спектрометрией.
Мкг/л (микрограмм на литр), мкг/мл (микрограмм на миллилитр), нг/мл (нанограмм на миллилитр), пг/мл (пикограмм на миллилитр).
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Как правильно подготовиться к исследованию?
- Не принимать пищу в течение 8 часов до исследования, можно пить чистую негазированную воду.
- Не курить в течение 30 минут до исследования.
Общая информация об исследовании
Витамины – это эссенциальные органические вещества, необходимые организму в небольших количествах. Они входят в состав коферментов, участвующих в окислительно-восстановительных реакциях, тканевом дыхании, синтезе белков, жиров и углеводов, образовании гормонов, росте, созревании и делении клеток, формировании тканей, защите от инфекций. По биохимическим свойствам витамины разделяются на водорастворимые (витамины группы В, витамин С) и жирорастворимые (витамины А, D, Е, К).
Организм человека не способен самостоятельно синтезировать витамины, они не накапливаются (кроме витаминов А, D, Е, В12), и поэтому существует ежедневная потребность в поступлении данных веществ с пищей. В небольшом количестве витамин К и В3 синтезируются микробиотой толстой кишки. Витамины содержатся, например, в ржаном хлебе, злаках, зелени, гречке, бобах, орехах, дрожжах, яичном желтке, молоке, мясе, печени, почках, грибах, растительных маслах, овощах и фруктах. При термической обработке, воздействии света их количество в продуктах уменьшается. Также они разрушаются под влиянием алкоголя, никотина, кофеина. Избыток водорастворимых витаминов достаточно легко выводится из организма, поэтому гипервитаминоз В развивается крайне редко. Жирорастворимые витамины способны накапливаться в организме и оказывать токсическое воздействие в высоких дозах.
Дефицит витаминов возникает при несбалансированном питании, заболеваниях желудочно-кишечного тракта, сопровождающихся нарушением всасывания питательных веществ, выделения желчи, или при повышенной потребности метаболизма в витаминах (например, при беременности, лактации).
Витамин В1 (тиамин-пирофосфат) является кофактором в реакциях декарбоксилирования аминокислот, превращения пирувата в ацетилкоэнзим А. При дефиците тиамина возникает болезнь бери-бери, которая характеризуется истощением, неврологическими поражениями, аритмиями, отеками, сердечной недостаточностью.
Витамин В2 (рибофлавин) необходим для образования и сохранения целостности эритроцитов, синтеза антител, тканевого дыхания. Совместно с ретинолом В2 обеспечивает целостность слизистых. Он способствует всасыванию железа и витамина В6 из пищи, предотвращает развитие катаракты. При его нехватке возникает хейлит, ангулярный стоматит, себорейный дерматит.
Ниацин (витамин В3) участвует в жизненно важных окислительно-восстановительных реакциях, в метаболизме белков, жиров и углеводов, пуриновом обмене, тканевом дыхании, распаде гликогена. Он обладает гиполипидемическим действием, снижает содержание атерогенных липидов в крови, расширяет мелкие кровеносные сосуды и улучшает микроциркуляцию. Удовлетворение потребности организма в ниацине также обеспечивается его синтезом бактериальной флорой кишечника из незаменимой аминокислоты триптофана при наличии витамина В6, рибофлавина и железа. При недостаточном поступлении ниацина поражаются кожа, органы пищеварения и нервная система. Дефицит В3 приводит к пеллагре – заболеванию, которое проявляется диареей, дерматитом, деменцией и без лечения может угрожать жизни. В то же время при употреблении высоких доз витамина В3 возникает гиперемия кожи лица и верхней половины туловища, головокружение, парестезии, аритмии, диарея, сухость кожи и слизистой оболочки глаз, кожный зуд.
Витамин В5 (пантотеновая кислота) – компонент кофермента А, необходимого для обмена жиров и углеводов. Недостаточность данного витамина отражается на работе всех систем, особенно нервной, мышечной, на желудочно-кишечном тракте, выделительной системе и коже.
Витамин В6 (пиридоксаль-5-фосфат) является кофактором аминотрансфераз и декарбоксилаз. При дефиците пиридоксина возникает огрубение кожи, себорея, периферическая нейропатия, микроцитарная анемия, болезненность языка, а при гипервитаминозе – сенсорная нейропатия.
Витамин В9 (фолиевая кислота) необходим для нормального созревания эритроцитов. При его недостаточности развивается мегалобластная анемия. На фоне синдрома мальабсорбции дефицит В9 возникает раньше других гиповитаминозов. Нехватка фолиевой кислоты в организме матери может стать причиной нарушения формирования нервной трубки у плода.
Витамин В12 (цианокобаламин) содержится в продуктах животного происхождения, способен накапливаться в организме. Его недостаточность наблюдается преимущественно у вегетарианцев. Нарушение его всасывания может возникнуть при заболеваниях желудка (аутоиммунном гастрите). Нехватка В12, как и фолиевой кислоты, приводит к мегалобластной анемии, но в отличие от недостатка В9, она вызывает фуникулярный миелоз – дегенеративное поражение спинного мозга.
Витамин С является антиоксидантом, коферментом многих метаболических процессов, принимает участие в образовании коллагена, биосинтезе карнитина, абсорбции железа, превращении допамина в норэпинефрин. Он способствует укреплению защитных свойств организма, усиливает иммунный ответ при инфекционных заболеваниях, заживление ран и рост тканей. Его основные источники – растительные продукты: шиповник, черная смородина, цитрусовые, зеленые овощи (особенно брокколи), томаты, картофель, перец. При нехватке/избытке витамина С развивается цинга, которая проявляется нарушениями формирования соединительной ткани, внутрикожными, внутрисуставными и внутриполостными кровоизлияниями, воспалением и кровоточивостью десен, болями в суставах, выпадением волос, сухостью кожи, резкой слабостью и утомляемостью, эмоциональной нестабильностью. При недостаточном поступлении в организм витамина С у детей нарушается рост костей.
Витамин А и бета-каротин (провитамин А) необходимы для нормального зрения, роста и дифференциации эпителиальной ткани, роста костей, развития плода, функционирования иммунной и репродуктивной систем. Бета-каротин – мощный антиоксидант, который защищает клетки от повреждающего действия свободных радикалов, обладает иммуностимулирующими и адаптогенными свойствами, предотвращает возникновение новообразований и сердечно-сосудистых заболеваний, поддерживает восстановительные процессы в эпителии кожи и слизистых, обеспечивает образование зрительного пигмента родопсина. Источниками каротина являются тыква, морковь, батат, зеленый лук, щавель, шпинат, латук, помидоры, красный перец, брокколи, грейпфруты, сливы, персики. Бета-каротин жирорастворим, поэтому его абсорбция усиливается при употреблении с липидами. Суточная потребность в нем – 2-7 мг. Нехватка этих витаминов сопровождается нарушениями развития костей и зубов, сухостью и раздражением глаз, потерей волос, снижением аппетита, кожными высыпаниями, рецидивирующими инфекциями и нарушениями ночного зрения («куриная слепота»).
Витамин D (кальцитриол) является предшественником гормона, ответственного за кальциевый обмен и регуляцию формирования костной ткани. Под действием ультрафиолета в коже он преобразуется в активные формы, препятствующие развитию рахита у детей и остеопороза и остеомаляции у взрослых. Его дефицит ассоциирован с сердечно-сосудистыми, онкологическими и аутоиммунными заболеваниями. Длительный гипервитаминоз может стать причиной кальцификации тканей и повреждения почек.
Витамин Е – это антиоксидант и кофермент в процессах формирования коллагена, участвует в регуляции липидного баланса, экспрессии генов, неврологических функций. На фоне дефицита витамина Е возникает периферическая нейропатия, миопатия.
Витамин К необходим для синтеза факторов свертывания крови. При его дефиците возникают кровотечения, а при переизбытке – гемолитическая анемия и гипербилирубинемия у детей.
По ряду различных причин может развиться дефицит отдельных витаминов (например, цинга, арибофлавиноз, пеллагра, бери-бери, рахит), но чаще наблюдается поливитаминная недостаточность. Нарушения пищеварения, патологии поджелудочной железы, печени и тонкого кишечника приводят к снижению абсорбции витаминов и провитаминов из пищи. Комплексное исследование на витамины в крови позволяет оценить обеспеченность организма данными эссенциальными веществами, дифференцировать различные варианты гипо- и гипервитаминозов, обосновать мероприятия по коррекции витаминной недостаточности и подобрать адекватную диету и терапию.
Для чего используется исследование?
- Для диагностики недостаточности жиро- и водорастворимых витаминов;
- для дифференциальной диагностики гипо- и гипервитаминозов и клинически схожих состояний;
- для оценки сбалансированности питания;
- для диагностики гипервитаминозов.
Когда назначается исследование?
- При синдроме мальабсорбции на фоне заболеваний желудочно-кишечного тракта (целиакия, муковисцидоз, воспалительные заболевания кишечника, патология поджелудочной железы, состояния после резекции желудка и/или тонкой кишки);
- при клинических признаках недостаточности водо- и жирорастворимых витаминов (дерматиты, длительная диарея, эрозии и частые травмы слизистых, хейлиты, стоматиты, неврологические нарушения, анемии);
- при обследовании пациентов, страдающих гипотрофией, алкоголизмом или находящихся на парентеральном питании;
- при стеаторее (повышенном содержании жиров в стуле в связи с их недостаточной абсорбцией в кишечнике).
Источник
Метод исследования витамин b12
Принцип определения витамина В12 в сыворотке. L. leishmanii это микроорганизм, несплособный синтезировать витамин В12. Если в подопытную среду, лишенную витамина В12, в которой добавлена проба сыворотки, ввести эту лактобациллу, то рост ее (измеренный турбидиметрическим способом) пропорционален количеству витамина В12, содержащегося в исследуемом материале.
Материалы для определения витамина В12 в сыворотке с помощью Lactobacillus leishmanii. Микроорганизмы для испытания: Lactobacillus leishmanii (N.C.I.В. 7884).
а) Раствор А, в состав которого входят: кислый гидролизат казеина, в достаточном количестве для 2,7 г. общего азота; 10 г. гидрированного уксуснокислого натрия (или 6 г. ангидрного); 2,5 г. КН2Р04; 2,5 г. К2НР04; 100 мг триптофана; 100 мг. гидрохлористого цистеина; 10 мг. аденина; 10 мг. гуанина; 10 мг. урацила; 10 мг. ксантина; 20 мл солевого раствора Б; до 400 мл дистилированной воды.
Кислый гидролизат казеина и соли перемешать с частью дистилированной воды, подогреть до 70°С и отфильтровать. Далее добавить отмеченные количества триптофана, цистеина и аденина (предварительно растворенные в небольшом количестве .N-раствора НО), затем гуанина, урацила и ксантина (растворенные в небольшом количестве B-раствора NaOH). Дополнить дистилированной водой до 400 мл.
б) Раствор Б (солей) состоит из: 10 г. MgS04. 7H20; 0,7 г амииачного железистого сульфата; 2 г. MnS04.4H20; 1 мл концентрированной соляной кислоты; до 250 мл дистилированной воды.
в) Раствор В (с витаминами), образованный из: 5 мг. гидрохлористого анеурина; 10 мг. пиридоксина; 5 мг, пиридоксала; 5 мг пиридоксамина; 1 мг парааминобензоиной кислоты; 5 мг рибофлавина; 5 мг. никотиновой кислоты; 5 мг. пантотената кальция; 5 мг птероилглютамовой кислоты; 20 мл дистилированной воды. (Раствор запечатывается в ампулы, вместимостью 1 мл, которые хранятся на холоде).
г) Полная основная среда (концентрации 5/3 от конечной концентрации) в достаточном количестве для 5 проб (дополнительно нормальная сыворотка и стандартные растворы) состоит из: 200 мл раствора А; 1 мл раствора В (с витаминами); 10 г глюкозы; 250 мг тиомаликовой кислоты; 62,5 мг натриевой соли гуанилиновой кислоты; 0,5 мл Tween 80; 0,5 г фенобарбитурата натрия; 2 мл раствора биотина из расчета 1 мкг/мл; до 300 мл дистилированной воды. (Глюкозу, гуаниловую кислоту и фенобарбитурат натрия развести в дистилированной воде и влить в смесь, перед дополнением объема до 300 мл).
д) Витамин В12 в виде раствора из расчета 50 мкг/мл (для приготовления стандартных растворов). Вымерить точно 1 мл (шприцем для туберкулина), налить в градуированный баллон вместимостью 50 мл хранить в рефриясераторе до 3 месяцев.
е) Раствор цианида натрия + буфер-ацетат (для испытания сыворотки). Приготовление: 20 мл 0,1% раствора NaCN, 50 мл буфера-ацетат натрия 0,4 М, с показателем водорода 4,5 и до 1000 мл дистилированной воды.
ж) Лабораторная посуда: пробирки 150 х 16 мм с алюминиевыми крышками; градуированная колба на 50 мл; 6 градуированных колб, на 20 мл каждая; 2 градуированные пипекти, по 5 мл; 2 градуированные липетки по 1 мл; 2 микропипетки по 0,1 мл; градуированные цилиндры, на 500, 250 и 50 мл; большая пробирка; колбы Эрленмайерана 500 и 200 мл.
Приобрести новую стеклянную посуду, исходно обработать ее на теплоте 10% азотной кислотой, хорошо прополоскать дистилированной водой и хранить лишь для определения витамина В12 (также материалы, используемые для чистки посуды); алюминиевые крышки прокипятить в воде с детергентом, затем прополоскать дистилированной водой; между двумя определениями, чистить лишь кипячением и полосканием.
Техника определения витамина В12 в сыворотке с помощью Lactobacillus leishmanii
1) Приготовление проб для испытания: отобрать у больного, без противосвертывающего вещества, количество крови (примерно 5—10 мл), с расчетом получения 2 мл сыворотки; осветлить после ретракции сгустка; когда определение проводится позже, сыворотку сохранять замороженной (при —20°С).
2) Подготовка предназначенного к исследованию микроорганизма. Исходно культуру микроорганизма проводить на 5 мл простой концентрированной основной среде, к которой добавить 1% растворимого протеолизата печени; после однодневной инкубации (18 ч) процентрифугировать, осветлить надосадочную массу; повторную взвесь бактериального осадка в оставшейся среде слить в стерильные ампулы, для образования запаса.
Культуры, предназначенные для определения, проводить на твердой среде, приготовленной из среды с протеолизатом печени и 1% агара (преимущество твердой среды заключается в том, что делает возможным контроль чистоты).
Приготовление материала для инъецирования. С твердой среды одну колонию впрыскнуть в 5 мл жидкой среды с протеолизатом печени; после 18-часовой инкубации процентрифугировать, осветлить надосадочную массу, осадок, трижды промыть стерильной дистилированной водой и образовать повторную суспензию в 5 мл стерильной дистилированной воды; 0,1 мл этой взвеси ввести в 5 мл простой концентрированной основной среды и оставить 18 часов для аэробной инкубации; далее из этой нераз-веденной культуры повторно ввести по 0,1 мл в два участка по 5 мл той же среды и еще раз подвергнуть 6-ти часовой инкубации. Таким способом получим однородный препарат для инъецирования с одинаковым вырастанием.
3) Техника испытания. По окончании приготовления полной основной среды (концентрация 5/3) приступить к приготовлению сывороточных экстрактов. Для этого, с помощью градуированной пипетки отметить 1 (или 2) мл сыворотки; из крупной пипетки добавить 19 (или 18) мл раствора цианида натрия + буфера-ацетат (получим разведение 1:20 или 1:10); заложить в автоклав на 30 мин., при давлении 2 атмосфер.
Приготовление стандартных растворов витамина В12. В целях получения стандартных растворов концентрации 25, 50, 100, 200, 400, 800 пг/мл развести 1 мл витамина В12 50 мкг/мл в дистилированной воде из расчета 1:50 (в градуированной колбе на 50 мл), затем в шесть градуированных колб на 20 мл каждая влить 0,5, 1, 2, 4, 8 и 16 мл и дополнить дистилированной водой. Далее по 1 мл этих растворов обработать подобно сывороточным пробам.
Приготовление пробирок для испытания. Набор проб слагается из 5 сывороточных проб для испытания, одной сывороточной нормальной (контрольной) и 6 стандартных растворов витамина В12. Определения проводить в двух экземплярах.
С помощью крупной пипетки влить в каждую пробирку по 15 мл основной среды (5/3), заложить в автоклав на 6 мин. при давлении 4 атмосфер; добавить по 10 мл автоклавированной сыворотки или стандартного раствора витамина В12, а затем по 0,5 мл приготовленного в течение 6 часов материала для инъецирования; хорошо взболтать для гомогенизации. В четыре стерильные пробирки влить (стерильными пипетками) по 15 мл инъецированной среды (без материала, содержащего витамин В12), в качестве контрольного препарата на стерильность.
Инкубацию провести в посуде для вакуума, из которой удаляется воздух (с помощью насоса для вакуума) и вводится водород. Этот метод обеспечивает более однородное и одинаковое развитие; продолжительность инкубации 36 часов.
Определение развития бактерий осуществляется турбидиметром с нефелометром (возможно фотометрическим путем), результаты получаются интерполяцией на стандартной кривой, построенной по значениям стандартных растворов В12.
Толкование результатов определения витамина В12 в сыворотке с помощью Lactobacillus leishmanii
Проще и быстрее прочих микробиологических способов метод, использующий L. leishmanii дает близкие к ним результаты, с хорошим воспроизведением. Нормальные значения колеблятся от 200 до 900 пг/мл.
При недостатке витамина В12 значения меньше 100 пг/мл, в то время как высокие наблюдаются у страдающих хронической гранулоцитной лейкемией (до нескольких тысяч пг/мл), после инъецирования В12, а иногда при отдельных заболеваниях печени. Метод не применять больным, проходящим курс лечения антибиотиками (угнетающими развитие микроорганизма).
Редактор: Искандер Милевски. Дата обновления публикации: 18.3.2021
Источник