Цель работы: изучение роли и значения витаминов в питании человека, освоение методов определения витаминов в продуктах.
Объекты исследования: сок, растительное масло, рыбий жир, молоко, витаминный комплекс.
Задание для выполнения: провести качественные реакции на водорастворимые витамины – тиамин (В1), рибофлавин (В2), ниацин (РР), пантотеновая кислота (В5), В6 (пиридоксин), Р (рутин), L-аскорбиновая кислота (витамин С). Провести качественные реакции на жирорастворимые витамины – витамин А, витамин Е (а-токоферол). Результаты наблюдений оформить в виде таблицы, сделать выводы.
Водорастворимые витамины
4.2.1.1 Реакции на витамин В1(тиамин)
Реакция с диазореактивом
Принцип реакции: в основе реакции лежит способность витамина В1 в щелочной среде с диазореактивом (смесь солянокислого или сернокислого раствора сульфаниловой кислоты с раствором нитрита натрия) образовывать сложное комплексное соединение оранжевого или красного цвета.
Материалы и реактивы: 1%-ный раствор сульфаниловой кислоты, 5%-ный раствор нитрита натрия, 10%-ный раствор бикарбоната натрия, тиамин в порошке или 5%-ный его раствор.
Оборудование: штатив с пробирками, пипетки, скальпель.
Порядок выполнения работы:в пробирку приливают 1 см 3 раствора сульфаниловой кислоты и 1 см 3 раствора нитрита натрия. Образуется диазореактив. Сюда же вносят небольшое количество (на кончике скальпеля) порошка или 0,5 см 3 раствора тиамина и по стенке пробирки осторожно добавляют 1 см 3 раствора Na2CO3.
На границе двух жидкостей наблюдают появление кольца оранжевого или красного цвета.
Реакция окисления тиамина в тиохром
Принцип реакции:витамин В1 в щелочной среде под действием гексоцианоферрата (III) калия (K3Fe(CN)6) окисляется в тиохром – пигмент жёлтого цвета, который в изобутиловом спирте даёт интенсивно синюю флюоресценцию:
Тиамин
Тиохром
Материалы и реактивы: тиамин в концентрации 5 мкг в 1 см 3 , 30%-ный раствор гидроксида натрия (NaOH), 1%-ный раствор K3Fe(CN)6, изобутиловый спирт.
Оборудование: источник ультрафиолетового излучения (флюороскоп), штатив с пробирками, пипетки.
Порядок проведения работы: к 1 см 3 раствора витамина В1 (исследуемого вещества) прибавляют 2 см 3 смеси (1 см 3 раствора K3Fe(CN)6 и 1 см 3 раствора NaOH), тщательно перемешивают и оставляют на три минуты. Затем прибавляют 5 см 3 изобутилового спирта, энергично и равномерно встряхивают в течение 2 мин. Изобутиловый экстракт тиохрома в ультрафиолетовых лучах имеет интенсивную синюю флюоресценцию.
4.2.1.2 Реакция восстановления витамина В2(рибофлавина)
Принцип реакции: образующийся при добавлении металлического цинка к концентрированной соляной кислоте водород восстанавливает жёлтый рибофлавин сначала в родофлавин (промежуточное соединение) красного цвета, а затем в бесцветный лейкофлавин.
Окисленная форма
Восстановленная форма
Материалы и реактивы: концентрированная соляная кислота (НСl), металлический цинк, 0,025%-ный раствор витамина В2 (взвесь рибофлавина в воде).
Оборудование: пробирки, пипетки.
Порядок выполнения работы: в пробирку приливают 1 см 3 раствора витамина В2, 0,5 см 3 концентрированной соляной кислоты и опускают кусочек металлического цинка. Выделяющийся водород реагирует с рибофлавином, восстанавливая его, и жидкость постепенно окрашивается в розовый цвет, а затем обесцвечивается. При взбалтывании обесцвеченного раствора лейкофлавин вновь окисляется кислородом воздуха в рибофлавин.
Наблюдают постепенное окрашивание жидкости в розовый цвет и её дальнейшее обесцвечивание.
4.2.1.3 Реакция на витамин РР (антипеллагрический, В5)
(ниацин)
Принцип реакции: при нагревании витамина РР с раствором ацетата меди образуется плохо растворимый синий осадок медной соли витамина РР.
Витамин РР
Медная соль витамина РР
Материалы и реактивы: витамин РР в порошке, 10%-ный раствор уксусной кислоты, 5%-ный раствор ацетата меди.
Оборудование: пробирки, пипетки.
Порядок выполнения работы: в пробирку помещают 5…10 мг витамина РР и растворяют при нагревании в 1…2 см 3 раствора уксусной кислоты. К нагретому до кипения раствору прибавляют такой же объём раствора ацетата меди. Жидкость становится мутной, окрашивается в голубой цвет, а при стоянии выпадает синий осадок медной соли никотиновой кислоты.
Наблюдают окрашивание испытуемой жидкости в голубой цвет, образование осадка синего цвета.
4.2.1.4 Реакция на пиридоксин (витамин В6)
Принцип реакции: при взаимодействии пиридоксина с раствором хлорида железа (FeCl3) жидкость окрашивается в красный цвет вследствие образования комплексной соли типа фенолята железа.
Материалы и реактивы: водный раствор (1%-ный ) витамина В6, 1%-ный раствор хлорида железа (FeCl3).
Оборудование: пробирки, пипетки.
Порядок выполнения работы: в пробирке смешивают 1 см 3 водного раствора пиридоксина и 2 капли раствора хлорида железа. Смесь встряхивают. Наблюдают окрашивание жидкости в красный цвет.
4.2.1.5 Реакции на витамин Р (рутин) (цитрин, витамин
проницаемости )
Реакция рутина с хлоридом железа ( III )
Принцип реакции: хлорид железа (III) образует с рутином комплексные соединения, окрашенные в изумрудно-зеленый цвет.
Материалы и реактивы: рутин (порошок и насыщенный водный раствор), 1%-ный раствор хлорида железа (III) (FeCl3), концентрированная серная кислота, 0,5%-ный раствор соляной кислоты, 10%-ный раствор гидроксида натрия, реактив Фелинга.
Оборудование: штатив с пробирками, пипетки.
Порядок выполнения работы: к 2 см 3 насыщенного водного раствора рутина прибавляют несколько капель раствора FeCl3.
Наблюдают появление зелёного окрашивания.
Реакция рутина с концентрированной серной кислотой
Принцип реакции: концентрированная серная кислота образует с флавонами и флавонолами флавилиевые соли, растворы которых имеют ярко-жёлтую окраску.
Порядок выполнения работы: к 2 см 3 насыщенного водного раствора рутина осторожно по стенке пробирки доливают 1 см 3 концентрированной серной кислоты.
На границе двух жидкостей наблюдают возникновение кольца, окрашенного в жёлтый цвет.
4.2.1.6 Реакции на витамин С (аскорбиновая кислота)
Принцип реакции: аскорбиновая кислота способна легко вступать в окислительно-восстановительные реакции.
Аскорбиновая кислота способна легко восстанавливать гексоцианоферрат-(III) калия (K3Fe(CN)6). При этом K3Fe(CN)6 восстанавливается до K4Fe(CN)6, который с ионами валентного железа даёт соль Fe4[Fe(CN)6]3 синего или зелёного цвета.
Порядок выполнения работы: к 1 см 3 раствора аскорбиновой кислоты прибавляют 1 см 3 раствора K3Fe(CN)6 и 0,5 см 3 раствора хлорида железа (III) (FeCl3).
Наблюдают образование сине-зелёного окрашивания.
Ж ирорастворимые витамины
4.2.2.1 Реакции на витамин А(р еакция Друммонда)
Принцип реакции: витамин А в бензольном растворе с концентрированной серной кислотой образует комплекс, окрашенный в синий цвет.
Материалы и реактивы: хлороформный раствор трихлоруксусной сурьмы (33%-ный ), хлороформ, 0,05%-ный масляный раствор витамина А в хлороформе или раствор рыбьего жира в хлороформе в соотношении 1:5, концентрированная серная кислота, ледяная уксусная кислота, насыщенная сульфатом железа (II).
Оборудование: штатив с пробирками, капельницы.
Порядок выполнения работы: в пробирку к 2–3 каплям раствора витамина А прибавляют 2-3 капли концентрированной серной кислоты.
Содержимое пробирки окрашивается в синий цвет, который через некоторое время переходит в фиолетовый и бурый.
4.2.2.2 Реакция на витамин Е(а -токоферол )
Принцип реакции: при взаимодействии с хлорным железом (III) (FeCl3) а-токоферол окисляется до а-токоферилхинона – соединения, окрашенного в красный цвет.
а-токоферол
Материалы и реактивы: 0,1%-ный спиртовый раствор α-токоферола, 1%-ный раствор хлорного железа (III).
Оборудование: штатив с пробирками, капельницы, пипетки.
Порядок выполнения работы: в сухую пробирку вносят 0,5 см 3 спиртового раствора а-токоферола, затем 0,5 см 3 раствора FeCl3 и тщательно перемешивают содержимое пробирки.
Наблюдают появление красного окрашивания.
Дата добавления: 2018-10-26 ; просмотров: 1375 ; Мы поможем в написании вашей работы!
Источник
Качественные реакции на витамины
Жирорастворимые витамины
v Качественная реакция на ретинолы (реакция с хлоридом сурьмы (III)).
Ретинол – циклический непредельный спирт, состоящий из шестичленного кольца и боковой цепочки, состоящее из двух остатков изопрена и первичной спиртовой группы в конце.
Ретинолы включают витамины группы А (антиксерофтальмические): А1 получен из печени морских рыб, А2 – из печени пресноводных рыб, а также их каротина, содержащегося в овощах и фруктах – предшественника витамина А2. Витамин А входит в состав зрительного пурпура – родопсина, накапливается в печени.
Принцип метода. Реакция основана на водоотнимающем действии хлорида сурьмы (III). При добавлении к ретинолу раствора хлорида сурьмы (III) образуется продукт присоединения, окрашенный в интенсивно синий цвет с максимумом поглощения света в области 620 нм. Эту реакцию используют для количественного определения ретинола спектрофотометрическим или фотоколориметрическим методом.
Исследуемый материал и реактивы
1. Рыбий жир или масляный раствор ретинола в хлороформе (0,05%). 2. Раствор хлорида сурьмы в хлороформе (33%).
Ход работы
В сухую пробирку (или на часовое стекло) вносят 1 каплю свежего рыбьего жира или 0,05% масляного раствора ретинола и добавляют 4-5 капель 33% хлороформного раствора хлорида сурьмы (III). При смешивании содержимое пробирки окрашивается в синий цвет.
v Качественная реакция на кальциферолы (бромхлороформная проба).
Кальциферолы или витамины D (антирахитические) существуют в виде нескольких изомеров. Различные кальциферолы отличаются друг от друга биологической активностью. Наиболее распространены эргокальциферол (витамин D2) и холекальциферол (витамин D3). В организме человека и животных образуется витамин D3 из 7-дегидрохолестерола после воздействия ультрафиолетовых лучей.
Принцип метода. Витамин D, содержащийся в рыбьем жире, при взаимодействии с раствором брома в хлороформе приобретает зеленовато-голубую окраску.
Исследуемый материал и реактивы
1. Рыбий жир 2. Раствор брома в хлороформе (1:60).
Ход работы
В сухую пробирку (или на часовое стекло) вносят 2-3 капли рыбьего жира и 2-4 капли раствора брома в хлороформе. Перемешивают. В присутствии витамина D постепенно появляется зеленовато-голубое окрашивание.
v Качественная реакция на викасол (реакция со щелочным раствором цистеина).
Витамины К (антигеморрагические) относятся к группе хинонов. В их основе лежит кольцо 1,4-нафтохинона с боковыми цепями – изопреноидными звеньями. Известны два природных витамина: К1 – филлохинон, желтоватая маслянистая жидкость и К2 – менахинон, представляет собой желтые кристаллы. У здорового человека витамин К постоянно синтезируется микрофлорой кишечника.
Витамин К входит в состав простетической группы фермента, участвующего в биосинтезе протромбина, необходимого компонента в процессе свертывания крови.
В лечебной практике широкое применение получил водорастворимый, синтетический препарат витамина К – «викасол».
Принцип метода. Викасол в присутствии цистеина в щелочной среде окрашивается в лимонно-желтый цвет, переходящий при стоянии в оранжевый.
На сухое часовое стекло наносят 5 капель 0,05% раствора викасола, добавляют 5 капель 0,025% раствора цистеина и 1 каплю 10% раствора гидроксида натрия. Появляется лимонно-желтое окрашивание.
v Качественная реакция на токоферолы (витамин Е) (реакцияс азотной кислотой).
К витамину Е (антистерильный) относятся производные токола и токотриенола. В их структуре имеется ароматический спирт токол и боковая изопреноидная цепь. Известно несклько изомеров витамина Е, которые отличаются расположением метильных групп в бензольном кольце. Наибольшей биологической активностью обладает α-токоферол. Полагают, что некоторые производные витамина Е наряду с убихиноном участвуют в окислительно-восстановительных реакциях, связанных с окислительным фосфорилированием. Запасы витамина Е могут откладываться в жировой ткани человека.
Принцип метода. Характерным свойством токоферолов является способность их к окислению за счет фенольного гидроксила. Химическая структура продуктов окисления и их окраска зависят от характера окислителя.
При действии слабых окислителей – хлорида железа (III), сульфата церия (IV) – образуется n-токоферилхинон желтого цвета. При действии на токоферол сильных окислителей, например, концентрированной азотной кислоты, образуется о-токоферилхинон красного цвета.
а-токоферол