Характер зависимости активности ферментов от наличия определенных витаминов
- Главная
- →
- Структура института
- →
- Лаборатории не входящие в состав отделов
- →
- Определение активности ферментов
Ферменты – это биологические катализаторы белковой природы, которые образуются в живых клетках и обладают способностью активировать различные химические соединения.
Характеристикой активности ферментов является скорость, с которой они катализируют ту или иную реакцию. Она измеряется скоростью превращения субстрата или скоростью накопления продуктов реакции. Измерять нужно начальную скорость превращения, а не количество субстрата, превращенного за определенный отрезок времени.
Комиссия по ферментам Международного биохимического союза дает понятие о стандартной единице активности. Единица активности (Е) – это количество фермента, которое катализирует превращение одного микромоля субстрата в мин при стандартных условиях (в оптимуме рН, при избытке субстрата, температуре 37 или 20º С).
Для определения ферментативной активности используют следующие методы:
1. Химический метод – количественное определение субстрата или продуктов с помощью химических реагентов (О-гликозилгидролазы – по образованию восстанавливающих сахаров).
2. Спектрофотометрический метод – измерение скорости ферментативной реакции по изменению поглощения субстрата при характеристической длине волны (лиазы – по образованию двойной связи).
3. Манометрический метод – определение количества газа, выделяющегося в процессе реакции (оксидазы – по поглощению О2, декарбоксилазы – по выделению СО2).
4. Поляриметрический метод – фиксируется изменение оптического вращения (β-фруктофуранозидаза).
5. Хроматографический – количественное определение субстрата или продуктов с помощью различных видов хроматографии: бумажной (анализ сахаров), тонкослойной (гликозидов со сложными агликонами), ВЭЖХ (аминокислотный анализ и др.).
Удельная активность – это число единиц активности (Е) на мг белка.
Источник
Характер зависимости активности ферментов от наличия определенных витаминов
ч ЦЙЧПК ЛМЕФЛЕ НОПЦЕУФЧП ТБЪОППВТБЪОЩИ УПЕДЙОЕОЙК, ОП ТЕБЛГЙЙ НЕЦДХ ОЙНЙ ОЕ ВЕУРПТСДПЮОЩ, Б ПВТБЪХАФ УФТПЗП ПРТЕДЕМЕООЩЕ НЕФБВПМЙЮЕУЛЙЕ РХФЙ, ИБТБЛФЕТОЩЕ ДМС ДБООПК ЛМЕФЛЙ. йОДЙЧЙДХБМШОПУФШ ЛМЕФЛЙ Ч ВПМШЫПК УФЕРЕОЙ ПРТЕДЕМСЕФУС ХОЙЛБМШОЩН ОБВПТПН ЖЕТНЕОФПЧ, ЛПФПТЩК ПОБ ЗЕОЕФЙЮЕУЛЙ ЪБРТПЗТБННЙТПЧБОБ РТПЙЪЧПДЙФШ. пФУХФУФЧЙЕ ДБЦЕ ПДОПЗП ЖЕТНЕОФБ ЙМЙ ЛБЛПК—ОЙВХДШ ЕЗП ДЕЖЕЛФ НПЗХФ ЙНЕФШ ПЮЕОШ УЕТШЕЪОЩЕ ПФТЙГБФЕМШОЩЕ РПУМЕДУФЧЙС ДМС ПТЗБОЙЪНБ.
чУЕ ЖЕТНЕОФЩ ПФОПУСФУС Л ЗМПВХМСТОЩН ВЕМЛБН, РТЙЮЕН ЛБЦДЩК ЖЕТНЕОФ ЧЩРПМОСЕФ УРЕГЙЖЙЮЕУЛХА ЖХОЛГЙА, УЧСЪБООХА У РТЙУХЭЕК ЕНХ ЗМПВХМСТОПК УФТХЛФХТПК. пДОБЛП БЛФЙЧОПУФШ НОПЗЙИ ЖЕТНЕОФПЧ ЪБЧЙУЙФ ПФ ОЕВЕМЛПЧЩИ УПЕДЙОЕОЙК, ОБЪЩЧБЕНЩИ ЛПЖБЛФПТБНЙ. нПМЕЛХМСТОЩК ЛПНРМЕЛУ ВЕМЛПЧПК ЮБУФЙ (БРПЖЕТНЕОФБ) Й ЛПЖБЛФПТБ ОБЪЩЧБЕФУС ИПМПЖЕТНЕОФПН. тПМШ ЛПЖБЛФПТБ НПЗХФ ЧЩРПМОСФШ ЙПОЩ НЕФБММПЧ (Zn 2+ , Mg 2+ , Mn 2+ , Fe 2+ , Cu 2+ , K + , Na + ) ЙМЙ УМПЦОЩЕ ПТЗБОЙЮЕУЛЙЕ УПЕДЙОЕОЙС. пТЗБОЙЮЕУЛЙЕ ЛПЖБЛФПТЩ ПВЩЮОП ОБЪЩЧБАФ ЛПЖЕТНЕОФБНЙ, ОЕЛПФПТЩЕ ЙЪ ОЙИ СЧМСАФУС РТПЙЪЧПДОЩНЙ ЧЙФБНЙОПЧ. фЙР УЧСЪЙ НЕЦДХ ЖЕТНЕОФПН Й ЛПЖЕТНЕОФПН НПЦЕФ ВЩФШ ТБЪМЙЮОЩН. йОПЗДБ ПОЙ УХЭЕУФЧХАФ ПФДЕМШОП Й УЧСЪЩЧБАФУС ДТХЗ У ДТХЗПН ЧП ЧТЕНС РТПФЕЛБОЙС ТЕБЛГЙЙ. ч ДТХЗЙИ УМХЮБСИ ЛПЖБЛФПТ Й ЖЕТНЕОФ УЧСЪБОЩ РПУФПСООП Й ЙОПЗДБ РТПЮОЩНЙ ЛПЧБМЕОФОЩНЙ УЧСЪСНЙ. ч РПУМЕДОЕН УМХЮБЕ ОЕВЕМЛПЧБС ЮБУФШ ЖЕТНЕОФБ ОБЪЩЧБЕФУС РТПУФЕФЙЮЕУЛПК ЗТХРРПК.
оЕЛПФПТЩЕ ЛПЖЕТНЕОФЩ
лПЖЕТНЕОФ | пВЭБС ТПМШ | чЙФБНЙО РТЕДЫЕУФЧЕООЙЛ |
NAD + , NADP + | рЕТЕОПУ ЧПДПТПДБ (ЬМЕЛФТПОПЧ) | оЙЛПФЙОПЧБС ЛЙУМПФБ — ЧЙФБНЙО тт |
FAD | рЕТЕОПУ ЧПДПТПДБ (ЬМЕЛФТПОПЧ) | тЙВПЖМБЧЙО — ЧЙФБНЙО ч 2 |
лПЖЕТНЕОФ б | бЛФЙЧБГЙС Й РЕТЕОПУ БГЙМШОЩИ ЗТХРР | рБОФПФЕОПЧБС ЛЙУМПФБ |
вЙПФЙО | уЧСЪЩЧБОЙЕ уп 2 | вЙПФЙО |
рЙТЙДПЛУБМШЖПУЖБФ | рЕТЕОПУ БНЙОПЗТХРР | рЙТЙДПЛУЙО — ЧЙФБНЙО ч 6 |
фЕФТБЗЙДТПЖПМЙЕЧБС ЛЙУМПФБ | рЕТЕОПУ ПДОПХЗМЕТПДОЩИ ЖТБЗНЕОФПЧ | жПМЙЕЧБС ЛЙУМПФБ |
тПМШ ЛПЖБЛФПТБ Ч ПУОПЧОПН УЧПДЙФУС Л УМЕДХАЭЕНХ:
- ЙЪНЕОЕОЙЕ ФТЕФЙЮОПК УФТХЛФХТЩ ВЕМЛБ Й УПЪДБОЙЕ ЛПНРМЕНЕОФБТОПУФЙ НЕЦДХ ЖЕТНЕОФПН Й УХВУФТБФПН;
- ОЕРПУТЕДУФЧЕООПЕ ХЮБУФЙЕ Ч ТЕБЛГЙЙ Ч ЛБЮЕУФЧЕ ЕЭЕ ПДОПЗП УХВУФТБФБ.
ч ЬФПК ТПМЙ ПВЩЮОП ЧЩУФХРБАФ ПТЗБОЙЮЕУЛЙЕ ЛПЖЕТНЕОФЩ. йИ ХЮБУФЙЕ Ч ТЕБЛГЙЙ ЙОПЗДБ УЧПДЙФУС Л ФПНХ, ЮФП ПОЙ ЧЩУФХРБАФ ЛБЛ ДПОПТЩ ЙМЙ БЛГЕРФПТЩ ПРТЕДЕМЕООЩИ ИЙНЙЮЕУЛЙИ ЗТХРР.
нЕИБОЙЪНЩ ДЕКУФЧЙС ЖЕТНЕОФПЧ
рЕТЧПОБЮБМШОЩН УПВЩФЙЕН РТЙ ДЕКУФЧЙЙ ЖЕТНЕОФБ СЧМСЕФУС ЕЗП УРЕГЙЖЙЮЕУЛПЕ УЧСЪЩЧБОЙЕ У МЙЗБОДПН — УХВУФТБФПН (S). ьФП РТПЙУИПДЙФ Ч ПВМБУФЙ БЛФЙЧОПЗП ГЕОФТБ, ЛПФПТЩК ЖПТНЙТХЕФУС ЙЪ ОЕУЛПМШЛЙИ УРЕГЙЖЙЮЕУЛЙИ R—ЗТХРР БНЙОПЛЙУМПФ, ПРТЕДЕМЕООЩН ПВТБЪПН ПТЙЕОФЙТПЧБООЩИ Ч РТПУФТБОУФЧЕ.
чБЦОЕКЫЙЕ БНЙОПЛЙУМПФОЩЕ ПУФБФЛЙ Ч БЛФЙЧОПН ГЕОФТЕ МЙЪПГЙНБ х ОЕЛПФПТЩИ ЖЕТНЕОФПЧ Ч БЛФЙЧОПН ГЕОФТЕ ТБУРПМБЗБЕФУС Й ЛПЖБЛФПТ. пДОЙ R—ЗТХРРЩ БЛФЙЧОПЗП ГЕОФТБ РТЙОЙНБАФ ХЮБУФЙЕ Ч УЧСЪЩЧБОЙЙ УХВУФТБФБ, ДТХЗЙЕ — Ч ЛБФБМЙЪЕ. оЕЛПФПТЩЕ ЗТХРРЩ НПЗХФ ДЕМБФШ Й ФП, Й ДТХЗПЕ. дЕФБМШОЩК НЕИБОЙЪН ДЕКУФЧЙС ЛБЦДПЗП ЖЕТНЕОФБ ХОЙЛБМЕО, ОП ЕУФШ ПВЭЙЕ ЮЕТФЩ Ч «ТБВПФЕ» ЖЕТНЕОФПЧ, ЛПФПТЩЕ ЪБЛМАЮБАФУС Ч УМЕДХАЭЕН: ЧЩУПЛБС ЙЪВЙТБФЕМШОПУФШ ДЕКУФЧЙС ЖЕТНЕОФБ ПВЕУРЕЮЙЧБЕФУС ФЕН, ЮФП УХВУФТБФ УЧСЪЩЧБЕФУС Ч БЛФЙЧОПН ГЕОФТЕ ЖЕТНЕОФБ Ч ОЕУЛПМШЛЙИ ФПЮЛБИ Й ЬФП ЙУЛМАЮБЕФ ПЫЙВЛЙ; БЛФЙЧОЩК ГЕОФТ ТБУРПМБЗБЕФУС Ч ХЗМХВМЕОЙЙ (ОЙЫЕ) РПЧЕТИОПУФЙ ЖЕТНЕОФБ Й ЙНЕЕФ ЛПНРМЕНЕОФБТОХА УХВУФТБФХ ЛПОЖЙЗХТБГЙА. ч ТЕЪХМШФБФЕ УХВУФТБФ ПЛТХЦБЕФУС ЖХОЛГЙПОБМШОЩНЙ ЗТХРРБНЙ БЛФЙЧОПЗП ГЕОФТБ ЖЕТНЕОФБ Й ЙЪПМЙТХЕФУС ПФ ЧПДОПК УТЕДЩ. уЧСЪЩЧБОЙЕ УХВУФТБФБ У ЖЕТНЕОФПН ЮБУФП ЧЩЪЩЧБЕФ ЛПОЖПТНБГЙПООЩЕ ЙЪНЕОЕОЙС, ЮФП ЧЕДЕФ Л РТБЧЙМШОПНХ (ПРФЙНБМШОПНХ) ТБУРПМПЦЕОЙА БНЙОПЛЙУМПФОЩИ ПУФБФЛПЧ, ФТЕВХЕНПНХ ДМС РТПФЕЛБОЙС ЛБФБМЙЪБ, Й ФЕН УБНЩН ХЧЕМЙЮЙЧБЕФ УРЕГЙЖЙЮОПУФШ ЖЕТНЕОФ—УХВУФТБФОПЗП ЧЪБЙНПДЕКУФЧЙС (ЙОДХГЙТПЧБООПЕ УППФЧЕФУФЧЙЕ). фБЛ ЛБЛ НБЛУЙНБМШОБС БЛФЙЧОПУФШ ЖЕТНЕОФБ ПВХУМПЧМЕОБ ПРФЙНБМШОПК ЛПОЖПТНБГЙЕК НПМЕЛХМЩ ЖЕТНЕОФБ Ч ГЕМПН Й БЛФЙЧОПЗП ГЕОФТБ Ч ЮБУФОПУФЙ, ФП ДБЦЕ ОЕВПМШЫЙЕ ЙЪНЕОЕОЙС ПЛТХЦБАЭЙИ ХУМПЧЙК, ЛПФПТЩЕ ЪБФТБЗЙЧБАФ УЧСЪЩЧБОЙЕ УХВУФТБФБ ЙМЙ ЛПОЖПТНБГЙА ФТЕФЙЮОПК УФТХЛФХТЩ ВЕМЛБ, ВХДХФ ЧМЙСФШ ОБ УЛПТПУФШ ЖЕТНЕОФБФЙЧОПК ТЕБЛГЙЙ. оБРТЙНЕТ, ЙЪНЕОЕОЙЕ То РТЙЧПДЙФ Л ЙЪНЕОЕОЙА УФЕРЕОЙ ЙПОЙЪБГЙЙ ЙПОПЗЕООЩИ ЗТХРР ЖЕТНЕОФБ Й, УМЕДПЧБФЕМШОП, ЧЕДЕФ Л РЕТЕТБУРТЕДЕМЕОЙА НЕЦТБДЙЛБМШОЩИ УЧСЪЕК Ч ФТЕФЙЮОПК УФТХЛФХТЕ. пРФЙНБМШОПЕ То ДМС ЛБЦДПЗП ЖЕТНЕОФБ ПЪОБЮБЕФ ОЕЛПФПТПЕ ПРФЙНБМШОПЕ УПУФПСОЙЕ ЕЗП ЙПОЙЪБГЙЙ, УППФЧЕФУФЧХАЭЕЕ ОБЙМХЮЫЕК ЛПНРМЕНЕОФБТОПУФЙ. йЪНЕОЕОЙЕ ФЕНРЕТБФХТЩ ЧЩЪЩЧБЕФ РТПФЙЧПТЕЮЙЧЩК ЬЖЖЕЛФ: У ПДОПК УФПТПОЩ, РТЙ РПЧЩЫЕОЙЙ ФЕНРЕТБФХТЩ ДП 37 — 40 П УЛПТПУФШ ЖЕТНЕОФБФЙЧОПК ТЕБЛГЙЙ ХЧЕМЙЮЙЧБЕФУС, ЮФП ЪБЛПОПНЕТОП ДМС ЛБФБМЙЪБ; У ДТХЗПК УФПТПОЩ, РТЙ ФЕНРЕТБФХТЕ ВПМЕЕ 50 П ОБЮЙОБЕФУС ДЕОБФХТБГЙС ЖЕТНЕОФБ. лЙОЕФЙЛБ ЖЕТНЕОФБФЙЧОЩИ ТЕБЛГЙК лЙОЕФЙЛБ ЖЕТНЕОФБФЙЧОЩИ ТЕБЛГЙК ПРТЕДЕМСЕФУС ПВТБЪПЧБОЙЕН ЖЕТНЕОФ—УХВУФТБФОПЗП ЛПНРМЕЛУБ:
|